实验问答21,908,073 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问免疫组化染色中有杂信号怎么办？

土井挞克树

1.抗体问题一抗用多克隆抗体容易出现非特异性染色，建议用高纯度，高效价的针对更具特异性抗原决定簇的单克隆抗体来解决。单克隆抗体很贵，不过结果真的很好。尤其是背景非特异性染色不会太深。真是一分价钱一分货。一抗过期也会造成杯具，所以要注意抗体的有效期。2.抗体浓度过高/孵育时间过长一抗浓度太高也是出现非特异性染色的常见原因。解决的办法就是预实验。每次使用新抗体前应该多做预实验，摸索出最理想的工作浓度，

3 回答472 围观

问免疫组化图像分析步骤？

土井挞克树

还是应该先测量，灰度后测量属于技术误差。

1 回答329 围观

问免疫组化实验中，想要获得好的实验图像，酸染色和碱染色应该如何选择？

土井挞克树

首先选择合适的染色剂，其次染色之前的抗体结合要合适，然后注意染色的细节。

1 回答232 围观

问白细胞与CRP不相符的发热

此用户已注销

病毒感染：WBC轻微升高，CRP不升高。影响因素：WBC易受年龄、日间变化、妊娠与分娩、药物治疗等因素的影响；而CRP不受生理、免疫状态、药物治疗等影响。正常人群中由于WBC的生理变化，特别是年幼儿童的白细胞变化大，白细胞大于10×109/L，而CRP阴性，属健康范围。老年人对疾病的反应能力差，感染后白细胞总数不能相应增高，而CRP却超出正常范围呈阳性，可协助临床诊断。WBC基础水平：有些患者原本

2 回答465 围观

问表中流式细胞仪给出的平均值是什么意思，是怎样得到的？

juyue2010

每个细胞测了多次荧光，取的平均荧光值

2 回答200 围观

问⾎液⾥的mononuclear cell（除外红细胞，⾎⼩板和破碎的细胞碎⽚），能不能⽤细胞⼤⼩来gating，只看我关⼼的细胞

土井挞克树

（1）红细胞还是小一些，无法100%区分，但还是可用把大部分红细胞gate掉。（2）溶血也很重要，如果你的红细胞多的话。（我猜不少，如果用ficol的话）。可以用氯化铵溶液，如ACK（Lonzo），（3）CD45是所有白细胞都表达的，可以用来区分RBC vs. WBC

1 回答244 围观

问PE抗体无法标记，而FITC抗体的结果却很好，为什么？

土井挞克树

1．PE荧光素可能冰冻过。如果冰冻过，建议另外买一管新的抗体。 2．多聚甲醛（PFA）可能会导致此问题。PFA降解后可释放出甲醇，从而影响染色。所以切记PFA尽可能新鲜配制，或者细胞尽可能不要固定，染完色就立即检测

1 回答379 围观

问做免疫组化，比如做 A基因，那么A基因在呼吸系统和生殖系统用的一抗和二抗是一样的吗?

juyue2010

一样的，一抗针对的是A基因，与它在哪个器官表达没有关系，二抗一般为种属抗性，只与你一抗来源有关

3 回答354 围观

问将引导电极置于体表或体内任何部位，为什么均可引导记录到心脏的生物电活动?如果将心脏取出结果又将如何，为什么?

土井挞克树

心脏跳动的时候还可以检测到，不跳动就检测不到了

1 回答505 围观

问死活细胞染料在流式染色中如何应用？

321 围观

问想用流式分巨噬细胞，需要怎么处理组织？

土井挞克树

可以从PBMC中通过阴选试剂盒分离较纯的、有活性的单核细胞。也可以用CD14、CD64和CD192作为人单核细胞的特异性标志物通过流式分选出单核细胞。原代人单核细胞可以在体外培养，需要注意的是，在血清或M-CSF存在的5天内，培养的单核细胞将开始分化为巨噬细胞。单核细胞以粘附和非粘附细胞的混合形式生长，粘附细胞的比例取决于培养基和刺激因子。除了原代单核细胞，人外周血单核细胞系THP-1也常用于对单

1 回答592 围观

问为什么Annexin V/PI不分群？

291 围观

问流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？

土井挞克树

信号检测时，每一个细胞通过激光，机器的探头都会检测到一个荧光信号，在内部产生一个电脉冲信号（波），这个信号机器记录为一个峰值，每一个峰值都有三个参数，高度（H），宽度（W）和曲线下面积（A），H 和W都是直接测出的，而A是根据机器的设置就算得出。这三个参数都可以作为流式细胞仪结果图的坐标。比如PI（FL-2，老式的机器用这个来表示荧光通道的数目，一般是1-4）的信号，既可以用PI-H来作图，也可以

1 回答2401 围观

问免疫组化的抗原修复方式如何选择

土井挞克树

第一种：细胞质抗原修复绝大多数细胞质抗原不做任何修复，一般也能获得相对稳定的染色结果。但采取一些抗原修复方法，可以是抗原决定簇释放的更加充分，进一步提高结果的可靠性和敏感性。所以我们一般采取的是强度适中，反应相对温和的抗原修复方法。推荐使用微波修复法。推荐的方法：微波加热修复法推荐的修复液：常用柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）第二种：细胞膜抗原修复绝大多数细胞膜抗原如果不做任何修复，它的显色结果相对

1 回答1501 围观

问兔子冠状动脉

土井挞克树

给你推荐一篇文章，文章里面写的很好

1 回答264 围观

问免疫组化中腊没脱干净，片子还能用

此用户已注销

免疫组化中腊没脱干净，片子不能用

2 回答351 围观

问做流式消化染抗体后不固定，可以第二天上机吗？效果影响会很大吗？

土井挞克树

不可以你可以固定好隔一天上机，但是不可以不固定

1 回答80 围观

问做免疫组化，不同组织怎么取材，才能有代表性？

土井挞克树

给你推荐一篇文章，这篇文章里面很全

1 回答397 围观

问免疫组化，组织冻融3次，会对结果造成什么影响

土井挞克树

免疫组化组织这样几次冻融，蛋白会变性，影响后续实验

2 回答510 围观

问免疫组化，特征性如何，什么情况会出现假阳性？

土井挞克树

1. 消除病理性色素的影响：当所检动物由于出血等原因造成吞噬含铁血黄素细胞增多时，为防止其与 DAB 显色呈现的黄褐色发生混淆，优先选用AEC显色剂。组织固定时间过长时，切片中容易产生福尔马林色素颗粒，影响结果观察，取材时应充分用流水冲洗，以消除影响。切片制作不当引起的非特异性着色在严重变性、坏死及炎性病灶处，在胶原纤维和结缔组织部位，在切片裱贴不平、折皱处以及组织边缘部位常会出现非特异

1 回答378 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序