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        毕赤酵母分泌表达

        相关实验:毕赤酵母中的表达实验

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        啥啥啥都得学

        电转到感受态smd1168里了,也长出来菌了,想问一下,长出来菌就是电转成功了吗?因为我做了两个样的电转,一个爆杯了,一个成功了,然后涂板 都长出来菌了!那是不是长出来就表示电转成功了?

        我后面做菌p鉴定的时候,用了通用引物(5AOX和3AOX)就没p出来,用了特异性引物p出来了一个条带,为什么通用引物没p出来呢?用了煮冻煮方法破壁,到底转没转成功啊?

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        3 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        电转过程包含长出来的其他物质和长出菌,可能会与转化后菌不一致的情况出现。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        长出菌也要看菌的形态是否符合要求,以及后续能否转染

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        loveliufudan

        有帮助

        长出来的菌并不一定意味着电转成功,因为在电转过程中,可能存在空白对照或未被转化的细胞等。您需要对您的电转实验进行验证,以确保您得到的菌株确实是您想要的表达克隆。您可以通过菌落PCR或测序验证克隆是否正确。

        关于您的通用引物没有扩增到克隆的问题,有可能是您使用的通用引物与您的毕赤酵母表达载体中的AOX1启动子区域没有匹配。您可以尝试使用其他引物或特异性引物来验证您的克隆是否正确表达。在进行PCR前,确保您已经正确破碎了细胞壁,以便DNA可以被充分释放并用于PCR反应。

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