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        原核蛋白pET32a诱导表达

        相关实验:外泌体的鉴定

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        我用pET32a载体,酶切位点EcoRI和XhoI,目的片段长度1326bp(没有终止子),诱导之后跑了胶,如下图:

        1:Marker,

        2:32a空载诱前;

        3:32a空载30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后;

        4:重组载体诱前;

        5:重组载体30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后;

        6:重组载体30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声上清;

        7:重组载体30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声沉淀;

        8:重组载体20℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后;

        9:重组载体20℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声上清;

        10:重组载体20℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声沉淀;

        图片描述

        图片中显示,诱导后,上清中有条带吗?我目前不能确定。而且在诱后超声沉淀中,包涵体居多,出现了两个条带,我判断的是位于上面的那一条是我做的目的蛋白,下面一条是什么?我判断的对吗?大家可以看下吗?

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        2 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        也有可能是分子伴侣。也可以你的目的蛋白有降解了。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        27bp=1kd,所以你那个1326bp 大概是50kd,就是加上histag的18个bp,也没有到70啊

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