elisa实验的空白对照是怎么设置的

空白对照可以使用PBS，如果是间接法，OD值偏高的原因可能是：

1.存在交叉反应，酶标二抗直接与抗原结合，增加背景；

2.空白对照孔洗涤时被污染；

3.底物使用前曝光或时间较长，背景色增加；

4.封闭效果不好，非特异性结合；

5.洗涤不充分；

一般是用样本稀释液作为空白对照，阴性血清样本作为阴性对照；梯度不明显是否是PBS污染；不是，尝试重新优化抗体对稀释比例，找到最佳抗体对稀释比例。

ELISA空白对照一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯：

1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。

2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔致。

在ELISA实验中，空白对照通常是使用PBS（磷酸盐缓冲盐水）或其他缓冲液来代替血清抗体。空白对照的目的是确定在没有特异性抗原和抗体反应的情况下，系统产生的非特异性吸光度。

如果你的空白对照的吸光度值较高（约为0.5），可能有以下几个可能的原因：

试剂或反应体系污染：确保使用的试剂和材料没有受到污染，例如试剂瓶口的污染、杂质等。此外，应注意避免交叉污染，例如使用干净的吸管和试剂盒。

酶标板非特异性吸附：在没有包被抗原的情况下，酶标板表面可能会非特异性地吸附其他物质，导致较高的吸光度值。尽量使用正确的包被抗原和适当的包被条件，以确保抗原能够均匀地吸附在酶标板上。

操作技术问题：ELISA实验中的操作技术对结果有重要影响。确保操作过程中的各个步骤正确无误，例如洗涤步骤、添加试剂的顺序和时间、反应温度等。注意避免溶液的过度蒸发或过度稀释。

关于稀释度增大时A450降低趋势不明显甚至增高的问题，可能有以下几个原因：

抗体浓度过高：如果血清抗体的浓度过高，可能会引起非特异性吸光度的增加。尝试适当稀释血清抗体，以使其在线性范围内进行检测。

抗体交叉反应：血清抗体可能会与其他非特异性抗体或试剂发生交叉反应，导致吸光度的增加。确保使用高质量的特异性抗体，并避免交叉反应的可能性。

其他实验条件：其他实验条件，如反应时间、温度、洗涤步骤等，也会对结果产生影响。确保所有实验条件都按照推荐的方法进行操作。

对于使用生理盐水注射小鼠得到下降趋势的情况，可能是由于生理盐水注射导致小鼠体内特定抗原的水平下降，从而导致ELISA结果的下降趋势。

ELISA实验空白对照设置有几种：

　　1. 空气空白水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。

　　2.底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值(只加底物和终止液)

　　3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。

　　ELISA空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品最好是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么?一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯：

　　1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。

　　2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。

ELISA试剂盒ELISA空白对照有几种：

　　1. 空气空白水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。

　　2.底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值(只加底物和终止液)

　　3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。

空白对照可以仅用稀释液代替检测样本

elisa实验的空白对照是用pbs代替血清抗体

可以PBS或你不加样本的溶剂做对照

elisa实验的空白对照可以用pbs代替