磁珠分选小鼠脾脏来源的Treg细胞，培养扩增结果不好，不知道哪里出来问题
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各位前辈，本人最近在做小鼠脾脏来源的Treg分选以及扩增。我利用研磨脾脏的办法获取淋巴细胞，制成单细胞悬液再进行磁珠分选。分选是应用的美天旎的小鼠Treg细胞分选磁珠。按照100-160万细胞/ml密度进行扩增培养。基础培养基为RPMI1640+10%FBS+1%双抗，同时添加：2mM L-谷氨酰胺、10mM HEPES 、50uM β-巯基乙醇、非必须氨基酸、100nM雷帕霉素。额外添加：鼠源IL-2 2000U/ml，Dynabeads™ 小鼠T 活化剂 CD3/CD28。反复进行了几次操作，但是细胞扩增效果不好，有的时候甚至看不到扩增，细胞状态就逐渐变差。不知道中间出现了哪些问题，在这里和各位老师请教一下，谢谢大家。
3 个回答
juyue2010
分选出的免疫细胞，初始接种密度非常关键，
huarenqiang5
建议培养48小时左右后再进行下一步操作。
土井挞克树
适当延长培养时间，感觉时间有点短。
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