• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        关于T细胞

        相关实验:T细胞亚群的诱导分化

        user-title

        旦旦考博

        有做Th17和Treg方面的前辈吗,刚刚接触免疫方面课题,求指导怎么提取和培养幼稚性T细胞,检测组织中的Th17 和Treg比例

        wx-share
        分享

        1 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        1、测Treg的时候不需要刺激,CD4+CD25+在细胞膜上,FOXP3+细胞内的转录因子,都是固有表达的蛋白,而IL-17是本身表达的都分泌都细胞外了,所有需要刺激、阻断剂、固定剂、破膜剂等,具体步骤应该你有了。

        2、一般刺激剂需要用培养基稀释到母液浓度(一般为工作浓度的500倍到1000倍)后分装,然后刺激的时候直接加到培养基中;


        PMA


        贮存液:PMA 溶于DMSO,浓度为0.1mg/ml,-20℃保存


        工作液:贮存液1:100 稀释于RPMI 1640(不含小牛血清-FBS)或PBS(无菌,无NaN3)中,此时为1μg/ml


        工作浓度:25ng/ml


        细胞培养:每100μl 反应体系加工作液2.5μl 工作液


        Ionomycin


        贮存液:Ionomycin 溶于DMSO,浓度为1mg/ml,-20℃保存


        工作液:贮存液1:20 稀释于RPMI 1640(不含小牛血清-FBS)或PBS(无菌,无NaN3)中,此时为50μg/ml


        工作浓度:1μg/ml


        细胞培养:每100μl 反应体系加工作液2μl 工作液


        3、PMA和Ionomycin是非特异性的激活T细胞,而cd3 和cd28抗体是通过与T细胞表面的CD3/CD28结合后来达到激活T细胞的效果,但需要注意的是,不是所有CD3和CD28抗体都具有活化T细胞的功能,需要仔细看清说明书。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序