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滤膜选择问题
Eason老歌迷
混合后带有机溶剂的一律过有机膜!
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问
做PTH项目,检测值太低了
Eason老歌迷
可能不是抗体的问题,可能是它的表达量本来就很低。
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问
Elisa检测时,本底值偏高,但是标曲的最大值偏低是因为什么?
Eason老歌迷
可能有几个原因。一个是粉末标准品没有充分溶解。二是标准品反复冻融。三是孵育时间和温度没有掌握好。四是显色时间要控制好。
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问
使用双向免疫扩散试验滴定抗体浓度时,沉淀线是形成一个不封闭的正多变形么?还是抗体浓度高的抗体与抗原形成的沉淀线要离抗原孔近?
Eason老歌迷
若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统,就能产生相应数量的分离的沉淀线。沉淀线形成的位置与抗原、抗体浓度有关!你要知道,抗原浓度越低,形成的沉淀线距离抗原孔越近。
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问
双向免疫扩散试验滴定抗体的效价时,沉淀线位置也遵循抗原抗体浓度的原则么?
Eason老歌迷
双向免疫扩散试验滴定抗体的效价时,沉淀线位置也遵循抗原抗体浓度的原则。将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中,使两者互相扩散,当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时,沉淀线在两孔的中间。如抗体过量,沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量,沉淀线靠近抗体孔。
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问
请问石蜡切片中所使用的二甲苯是哪一种呢?
bamboopiggy
就是最普通的二甲苯,一般500ml一瓶的那种
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问
免疫组化的冰冻切片前期处理
whilt-shirt
理论上是不可以的,会影响实验结果
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问
移植鼠瘤免疫组化可以用鼠抗人抗体吗
Eason老歌迷
我也做裸鼠移植瘤的,我老师说虽然是长在裸鼠身上,但它长的瘤子还是人的细胞长的,所以应该用人的抗体,因为细胞的基因型是人的基因型。
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问
免疫组化和 Western Blot 可以用同一种抗体吗?
申东熙老伯
可以用同一种抗体,买的时候就看好,买WB和免疫组化都能用的,这两个都能用的抗体只是稀释浓度不一样。
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问
诱导蛋白诱导不出来是什么原因,有什么可以诱导出来的方法吗?
天一湖医者
一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
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问
向各位大佬求助,我养的原代小胶质细胞,为什么总是很容易就飘了啊?
balalaLy
可能是消化的方法以及培养条件不是很适宜。
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问
IMage pro plus无法显示计算面积
Eason老歌迷
去measure里面,找到count/size。里面“select color”选着颜色,即需要统计颜色的面积,可以直接使用corlor cube based 里面的吸管工具。例如这里统计白色的部分。记得选中预览模式,就可以看到选中的区域了。也就是图中红色部分会被统计,close回答上一个界面,进行计算,点击“count”。count之后没啥反应啊,是的,表面上看起来如此。其实是要去调出结果。过v
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问
请问为啥金葡涂板的时候会有很多划痕
balalaLy
稀释菌液后再涂板或者使用琼脂糖珠子摇板
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问
厚壁菌门与拟杆菌门
Eason老歌迷
就正常培养就行了,它两属于厌氧菌,
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问
免疫荧光和HE染色的冰冻切片
Eason老歌迷
不行,不可以,少了一个步骤,你得固定
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问
多巴染色的多巴孵育可以后续对切片进行孵育吗?相较于最开始使用孵育有什么大的差别吗?
Eason老歌迷
可以后续对切片进行孵育。相较于最开始使用孵育没有太大差别。
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问
请问灌注后的小鼠做免疫荧光和HE染色的冰冻切片,可以直接液氮速冻后进行OCT包埋吗?不经过脱水处理
balalaLy
常规做法是脱水后放入OCT包埋,冷冻,组织直接放液氮很容易碎。如果怕有冰晶引起片子有空洞,可以使用一种防冻液(具体什么名忘了),做脑组织切片的同学很喜欢用,说效果很不错
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问
细菌定量荧光标记实验,加入钙黄绿素后直接发荧光,而不是等到细菌生长之后再发荧光来较快的提示细菌有没有生长,怎么调整实验?
Miracle星
检查一下,是不是步骤有不对的地方?钙黄绿素染色步骤1、用DMSO制备1 mM 的钙黄绿素溶液,并用PBS将其稀释制成1~50 μM的钙黄绿素溶液。2、将1/10细胞培养基体积的钙黄绿素溶液加入到细胞培养基中。3、在37℃培养细胞15-30分钟。4、用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。5、用490 nm激发波长,515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。a、如果钙黄绿素溶液很难进入细胞,可以
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问
多巴染色大概要孵育多久?看文献甚至孵育了十几个小时这样的情况下多巴很容易氧化标变质。
天一湖医者
一般是37度孵育4小时就可以了。
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问
通透是否会影响细胞膜表面蛋白染色?
whilt-shirt
会有点影响,有可能会导致膜蛋白染色效果变差
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