胶回收的产物低，浓度不足以做连接时怎么办？

二次PCR或者直接连，现在重组酶效率很高，只要有产物就可以连上

1、把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。

2 、溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。

3、 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。

提高胶回收量的办法：

1、 增加电泳时的上样量。

2、电泳缓冲液用新鲜配制的。

3、切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。

4、把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。

5、 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。

6、 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。

7、 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。

8、最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。

9、 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。

10、将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。

1. 可以利用该胶回收的产物再次进行PCR扩增，以获得高浓度的目的DNA
2. 其次可以增大电泳时点样的体积，以提升胶回收的产物浓度
3. 如果浓度过低，也可尝试降低载体的量，使胶回收产物和载体的摩尔比在10：1~1：1之间

1、 增加电泳时的上样量。

2、电泳缓冲液用新鲜配制的。

3、切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。想了解更多精彩内容，快来关注ELISA检测试剂盒抚生

建议适当增加循环数来提高目的条带的浓度，或者适当延长在柱子上停留的时间或减少切胶体积等试试看。