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        求助 提PBMC的红细胞裂解法

        相关实验:红细胞形态检查实验

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        实验室小助理夏奇

        由于课题需要用PBMC跑流式,一管4-6E6,再加上浓度梯度少要10管每个病人那就是40ml,感觉按密度梯度离心提出来的细胞偏少,也考验技术,老师推荐用裂红的方法,一直没有搜到裂红具体怎么加红细胞裂解液,要静置多久,再离心还是用PBS洗……有没有大神做过求救🆘!万分感谢

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        3 个回答

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        此用户已注销

        有帮助

        加入3~5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。加入1倍血液体积的红细胞裂解液重悬沉淀,500g离心3分钟,弃上清

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        红细胞裂解法(可选以下2种方式)

        ① 样品染色后溶解红细胞

        1. 取肝素或EDTA抗凝外周血100μl每份,放置1.5mL离心管中,加入荧光抗体1-2μl(按抗体说明书),人的样本室温避光15-30min,小鼠的样本4℃进行染色;
        2. 加入3倍体积的红细胞裂解液,混匀,避光孵育1-5min;
        3. 离心800g,2min,弃上清;
        4. 1mL PBS重悬洗1-2次,离心800g,2min,弃上清;
        5. 上样Buffer300-500μL重悬,300目细胞滤网过滤,准备上机分析。

        ② 样品裂解红细胞后染色

        1. 在100-200μL抗凝全血中加入3倍体积的红细胞裂解液轻轻混匀;
        2. 室温或冰上静止5-10min,其间轻混匀1-2次;
        3. 红细胞裂解后,溶液清澈透明;
        4. 离心800g,2min弃上清,收集细胞;
        5. 1mLPBS重悬洗样品1次;
        6. Buffer300-500μL重悬,300目细胞滤网过滤,准备上机分析。
        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助
        1. 每管加入100ul抗凝全血;
        2. 每管加入2ml红裂液,立即轻柔混匀,室温避光孵15min;
        3. 1500rpm离心5min 4℃,弃上清;
        4. 2ml流式Buffer洗两遍,350g离心5min,弃上清;
        5. 加入表面抗体(IgM-PE 2ul/100ul体系),避光孵育20min;
        6. 300ul流式Buffer重悬细胞。
        7. 检测后分析 (见下图)。图片描述
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