跑大分子量的膜蛋白如何能跑得好看一点

楼上的回答很好很全面。我想到的一点是尽量用低浓度的胶来跑，转膜时间稍微长一点，然后也要选对合适的marker

可以考虑以下几点：

1. 凝胶选择：选择适合分离大分子量蛋白的凝胶。对于较大的蛋白质，使用较低浓度的聚丙烯酰胺凝胶（例如8-12%）或聚丙烯酰胺-琼脂糖复合凝胶可以提供更好的分离效果。

2. 蛋白质加载量：减少样品的加载量可以提高分离效果。对于大分子量的蛋白质，尽量将加载量控制在较低水平，以避免过度拥挤和模糊的带状。

3. 电泳条件：优化电泳条件，例如电流和电泳时间，以提高分离效果。较长的电泳时间和较低的电流可以更好地分离大分子量蛋白质。

4. 样品预处理：对于大分子量蛋白质，可以考虑进行样品预处理，例如使用变性剂或蛋白酶进行部分降解，以改善分离效果。

5. 蛋白转移条件：如果您计划进行Western blot等后续实验，确保在电泳后将蛋白质有效地转移到膜上。优化蛋白转移条件，包括时间、电流和转移缓冲液的配方，以确保高效转移和良好的膜上显示。

需要注意的是，不同的膜蛋白可能具有不同的特性和分离难度，因此可能需要根据具体样品和目标蛋白质进行优化和调整。根据实验需求和样品特性，逐步优化上述因素，可以帮助您获得更好的分离效果和可视化结果。

1.选对凝胶很重要

3种最常见的凝胶包括Tris-Glycine, Bis-Tris and Tris-Acetate.

Tris-Acetate 凝胶的PH为7，跑大分子蛋白会呈现很高的分辨率。跑大分子蛋白时，推荐使用Tris-Acetate 凝胶。

2.凝胶浓度很重要

既然选择了Tris-Acetate 凝胶，还有几个要考虑的问题。凝胶浓度与孔径成反比：浓度越小，孔越大。较大的蛋白质更容易通过较大的孔，所以建议使用低百分比的凝胶，如7％。可以使用梯度凝胶或非梯度凝胶，梯度凝胶非常适合新样本。

2.提高转移buffer中的SDS，减少甲醇

转移buffer的组成至关重要。如果有甲醇存在，大分子蛋白很容易沉淀。通过减少转移buffer中的甲醇百分比（10％或更低）来避免这种情况发生。为了进一步确保蛋白质不会沉淀，考虑添加SDS至终浓度为0.1％。SDS向蛋白添加均匀的负电荷，使得它们更容易从凝胶转移到膜上。

4.选择合适的膜

膜一般有PVDF膜或NC膜。跑大分子蛋白选择PVDF膜。如前面所说，如果有甲醇存在，大分子蛋白很容易沉淀。而PVDF膜不需要在转移buffer中添加甲醇，目的蛋白转印的机会更高。两种类型的膜都有各种孔径尺寸，最常见的是0.2um和0.45um。与凝胶一样，较大的蛋白比较小的更容易穿过大孔隙。大多数蛋白质（> 20kDa）可以用0.45um膜转移，避免使用0.2um孔径。