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        求助,WB没有条带背景一片黑

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_0ye1ezhq

        新手小白跑WB,一抗和二抗的稀释比例都和师姐的一样,但是师姐就可以做出来,而我的却是一片黑,只有Maker的位置是白色的,请问是什么原因呢?

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你确定你所有的步骤都和师姐一样?尤其是封闭液以及封闭时间,还有就是洗膜时间,洗膜用的液体?感觉你这个是抗体不好,非特异性结合,你用的抗体也是和师姐一样么?

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        背景黑可能有以下几个原因:
        1.没有封闭好,但这个可能很小
        2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例
        3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        如果是同一个抗体别人做出来了,你做不出来,那就是实验过程的问题,提蛋白的步骤有没有问题,蛋白浓度会不会太低了,转膜有没有问题,一个一个排除

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