怎么提高wb结果重复性，并且让杂带少一点

内参稳定说明上样量稳定（应该大致是一样的），所以不存在什么上样量不一样的问题；出现这样的结果，问题出在每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。但据我所知，WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真，仔仔细细做几遍，很可能重复性就做出来了。只是个人观点。

1.实验条件：

◆ 一抗特异性是否不高，是否存在交叉反应；

◆ 二抗特异性是否有非特异性结合，可不加一抗验证；

◆ 一抗二抗浓度是否过高；

◆ 上样量是否过大；

◆ 封闭是否不足；

2目标蛋白：

◆ 样品是否有降解；

◆ 目标蛋白是否有剪切活化；

◆ 目标蛋白是否有修饰；

◆ 目标蛋白是否存在二聚体、多聚体形式；

◆ 目标蛋白是否存在多种isoform；

3实验样本：

◆ 样品材料是否出错，样品制备方法是否正确；

◆ 所用细胞是否传代过多积累突变。

1.样品处理好好后，分装冻存。2.重复的时候,只要趋势一致就好，不要非要条带一模一样。3.配好的抗体用2-3次就换新吧。4.你后期出现杂带，可能是蛋白降解了。

1、更换一抗，换单克隆的。

2、不换一抗，降低一抗稀释比，这样目的条带会变弱，不过杂带也会，有时候就可以去掉杂带了。

3、多封闭一下。

4、洗膜的时候多洗几次。

确保所有的操作都是一样的，这有可能是转膜不完全或者发光液加的不一样导致的；另外，可以通过降低一抗浓度来减少杂带