WB条带每次曝光的时候条带边缘都有黑色的一圈是什么原因？

这是发光液加多的原因导致的，建议少加一点或者加完后用纸巾吸掉

第一 建议用5%脱脂奶粉封闭，有条件的话封闭过夜，室温下至少封闭1小时。

第二 你 一抗二抗 稀释液应该都用 含脱脂奶粉的来配，这样可以降低背景。

第三 这种现象我也遇到过，很可能是你一抗或二抗刚刚稀释之后，没有混均匀，然后就把膜放下去了。有的时候局部浓度特别大的时候，会造成严重的非特异性结合。

第四 洗膜不需要洗那么长时间的。一般洗3次，每次6~7分钟就可以了。敷完二抗之后洗3次，每次10分钟，

泳道内背景高，泳道外背景不高。不是封闭的原因，不是显影的原因，也不是漂洗不够，而是一抗或二抗的非特异性结合。
建议：减少一抗或二抗的作用时间，必要时降低浓度，蛋白上样量不要太高，最好不高于150 μg/孔

你给个图可能好解释一些，这样我只能猜1.膜没洗好，2.显影的时候，发光试剂加水不匀。3可能过曝了。