请问WB跑出来的条带跟目的条带大小有偏移是为什么？

1. 确定蛋白是内源的还是外源的，如果是外源蛋白是不是全长序列；

2. SWISSPROT 数据库查询该蛋白是否有其他 isoform；

3. SWISSPROT 和文献查询蛋白质是否有剪切活化，剪切活化造成蛋白变小；

4. 确定蛋白质是否是二聚体或多聚体。

5. NCBI 和 SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰，如有修饰会导致蛋白质增大；

胶浓度不对，不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差，可以调整浓度。

抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度，延长孵育时间。

1）酶失活，建议直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。

2）目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体，建议查询相关文献确定。

有可能是配胶时不均匀，建议重新配胶试试

可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应，比如说100KD的蛋白你用12%的胶跑，或者说20KD的蛋白你用6%的胶跑。

WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真，仔仔细细做几遍，很可能重复性就做出来了

电泳电流不均一。建议换用新的电泳槽； 不使用两边的两孔

1.如果第一次跑，大小有偏移，建议看抗体的说明书，有些抗体的位置和预测的位置是有区别的。2.如果以前不这样。这次这样了，可能是你用了不同浓度的胶。会出现和marker比，轻微的偏移。