为什么有的时候跑不出条带，然后背景还很糊？

背景模糊可能有以下几个原因：

1. 没有封闭好，可能很大

2. 一抗浓度太高，适当降低增加一抗稀释比例，你最好先做个titration，确定一个最佳的抗体稀释比例

3. 二抗孵育时间太长，一般室温45min，二抗切不可孵育时间太长

没有目的条带是主要问题，检查样品蛋白和抗体。

可能是上样量不够，或者转膜没转好，或者封闭不完全

主要是抗体不特异的binding，因为显不出条带，只能往最弱的光线扫，才出现煳背景