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        为什么wb条带的位置和kd值不一样

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        LEE9

        为什么跑出来的条带位置和这个蛋白的kd值有很大偏差?

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        5 个回答

        user-title

        未来9

        有帮助
        • 首先,SDS-PAGE电泳时分子量marker不能作为绝对标准,只是一个参考值。
        • 其次,有的蛋白(如组蛋白和一些易形成dimer的蛋白,还有一些比较难变性而又形成紧凑的球形结构的蛋白)在用常规方法电泳时会出现异常行为(表观分子量与实际分子量不符)。
        • 以前对于这个问题,似乎听实验室的师兄说,SDS-PAGE鉴定表达的外原蛋白,分子量和Marker有一定的出入,一般在10kD左右浮动还是可以接受的,也许就是你所遇到的这种情况.不过最终的结果还是要看你的WB结果了;
        • 也许有可能是你的蛋白表达过程中提前终止,那就没有办法,只有更换载体。
        user-title

        sing生物狗

        有帮助

        可以看一下抗体公司给出的参考图,可能蛋白marker在不同浓度的胶里面显示的大小不一致。

        user-title

        lyang556

        有帮助

        常见的因素
        1.翻译后修饰,如磷酸化、糖基化等,增加了蛋白质的大小。
        2.翻译后裂解,许多蛋白合成的蛋白,然后裂解成活性的形式,如亲半胱天冬酶
        3.剪接变异体,选择性剪接可以从同一基因中产生不同大小的蛋白质。
        4.相对电荷,氨基酸的组成(带电与非带电)
        如二聚蛋白多聚体。一般会出现分子量变小的情况,尽管强的相互作用会导致分子量更高的条带的出现。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        这个有可能不是你要的条带,建议重新实验

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        这个是因为不同配比的胶,蛋白的位置会略有差距,最好按照marker的位置切。当然不排除蛋白的修饰引起的蛋白条带位置的改变。第一跑,如果不放心,可以跑个全膜看看。

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