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        磷酸化的抗体为什么总是杂不好

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        听夏666

        磷酸化的抗体是用bsa封闭吗?封闭时间2小时吗?为什么总是杂不好呢?有没有优化方案

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        4 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        我牛奶和bsa都用过,这个其实是要看你的抗体好不好用,如果抗体好用,怎么杂怎么出。如果抗体不好用,一般都杂不好。此外,可以考虑在收样的lysis里面加点磷酸酶抑制剂。实在杂的难看,就换家公司买抗体,磷酸化的抗体,一般cst的还是不错的。

        user-title

        未来9

        有帮助

        选择购买口碑较好的公司的一抗;孵育一抗的时候,建议用新鲜抗体;若磷酸化的条带很淡,有时候达不到制图标准,这点可以加大上样量来解决;严格遵守洗膜时间,不得减少次数,每个步骤洗 3 次,每次可以洗长一点,比如(11-12 分钟)。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        磷酸化的蛋白很难跑,一般是使用5%BSA封闭,可以试着更换更好的抗体

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        bqejjh123

        有帮助

        强推BSA封闭,不要用脱脂奶粉封闭,BSA封闭对磷酸化的抗体效果非常好,而且也不贵,具体怎么配百度之。另外,BSA封闭液倒是可以反复使用不至于向奶粉一样臭掉,用来孵育一般非磷酸化的抗体,效果同样棒棒哒!

        再者,封闭时间可以延长,一般封闭2-3小时的情况下,可以封闭延时到4小时,所以按照从早到晚做实验的时间,用BSA配好封闭液开始封闭的时候,您就可以慢慢的约个火锅唱个歌再回来了,实验本来就很辛苦,不要再依赖百度外卖大叔了。

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