WB 实验中二抗用 TBST 稀释液是否容易出现杂带？

1.我做 WB 的目的蛋白 MTSS1 说明书（CST的）中写道“For western blots, incubate membrane with diluted antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween-20 at 4°C with gentle shaking, overnight”，我在第一次稀释抗体的时候配了 100mL 稀释液（100mL 1×TBS+5g BSA+100ul Tween-20），放在 4 度冰箱，那以后在稀释抗体的时候能否用这个稀释液啊？倒了太可惜了。我是 7 月底配的，用这个稀释液会影响一抗孵育效果吗？2.我每次实验要用一抗（1:1000）好几毫升，所以是回收使用的，放 4 度冰箱的，到什么程度就不能再用了要用新的啊？3.封闭和一抗都是用 3% BSA-TBST，BSA 和牛奶有何区别啊？我一直用的是 5% milk-TBST封闭的，如果也改用 BSA 室温封闭 1h，是不是杂带就会少很多啊？4.二抗用 TBST 稀释是否容易出现杂带？如果加了牛奶那二抗就不能回收了吧？