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        为什么用 ELISA 试剂盒检测样品显色无差异?

        相关实验:ELISA 实验

        user-title

        __未知元素

        用ELISA的试剂盒检测,标准曲线能做出来,但检测血清的时候显色微弱而且几乎没有差异性,有人知道为啥吗……
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        10 个回答

        user-title

        jm晶美生物

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        显色弱灵敏度低。在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后,酶标板中孔的显色比较浅,即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因: 1.产品过有效期,试剂没有按规定进行适当的保存。 2.试剂,标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。 3. 少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。 4. 洗板或者加样过程中,酶标物受污染失活。 5.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。 6.洗涤液稀释倍数不符合要求,洗板次数过多,洗板冲击力过大,洗板浸泡时间过长。 7.底物溶液TMB显色时间太短。
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        远古的早晨

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        严格正确稀释
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        ccc2

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        任何事情都要从规范开始进行
        user-title

        zhangyanxia2013

        有帮助
        (1)待测血清浓度过低,或者是稀释倍数过多。 (2)操作问题。 (3)注意反应的条件,要严格控制。
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        ashearer

        有帮助
        有预实验过么,确定样本和试剂盒是否结合么
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        ashafriend

        有帮助
        1、操作问题,不解释。 2、检测的位点疏水。 3、预计检测的亚基和你样本中的不一样,比如不同物种、不同前处理导致的。 4、样本降解了。
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        wangshuangmyl

        有帮助
        如果你操作过程正规,可能是过度稀释了,建议你正确稀释。还有一个就是温度的问题,一定按说明书的温度,否认试剂不能发挥作用,就会功败垂成,我的一点经验之谈。
        user-title

        左中右

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        样品是如何收集的,血清保存在哪里,保存了多久,上样时稀释了多少倍,有没有按照说明书去稀释样品,(有的试剂盒会给出尿液、血液、细胞上清不同的稀释试剂),操作过程是否正规,此外,最重要的是,你的检测的细胞因子是不是本身在血清中含量就很低,或者样本之间表达量的确没有差异。
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        夏日风车lily

        有帮助
        血清的提取和保存注意温度,一般保存在-80度的超低温冰箱
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        做最好的自己dc

        有帮助
        如果待测样品没有问题,操作过程没有错误的话,有可能是稀释过度造成的
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