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泳道两侧多出两条竖着的线
汤姆卜丽波
可能是你前三个样品预混没做好,因为其他条带都可以,所以胶应该没问题
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问
WB条带问题
balalaLy
转膜没有问题,是跑胶的时候marker渗漏到旁边的位置去了,因为渗漏的量少,跑胶的时候不明显,并且在边边的位置你观察不到。
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问
wb实验
balalaLy
商品化的预制胶效果都不错,你可以找一家公司让他们给一块试用再决定
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问
泛素化实验问题——泛素化条带不均匀
灵枢天问
这看起来像是显影剂没铺上或者转膜没转到
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病毒感染某细胞后,为什么免疫荧光能检测到该病毒核蛋白的表达,pcr也能检测到该病毒基因的大量复制,WB检测不到条带,操作试剂无误
bamboopiggy
可能在这个细胞中,条带的位置有改变,你试试孵育全膜,做wb看看。
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问
ECL显影的时候膜全亮,也看不见条带,压片也经常胶片全黑是什么原因呢?有时候包裹保鲜膜的时候有些地方就变黑了,压出来的结果也花的
汤姆卜丽波
也有可能是你机器设置的问题,显影剂不用滴特别多
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问
FABP3的h9C2细胞蛋白总跑不出来,小鼠心脏组织却可以出,可能是什么原因?谢谢!
bamboopiggy
h9c2是大鼠心肌细胞系,可能你的抗体不识别大鼠的
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问
请问除了使用质谱和核磁共振法,怎么确定一个蛋白质被糖基化修饰了?
汤姆卜丽波
糖基化位点的确定方法还可以用① PNGase F酶法;②Endo H酶法;③三氟甲基磺酸(trifluoromethananesulphonic acid,TFMS)法。
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问
为什么WB跑目的蛋白刚开始两三次特别好,后来就信号弱,内参一直都没问题?
balalaLy
蛋白降解了?可以把蛋白适当分装避免反复冻融。抗体失效或者效价降低?一般抗体用个4-5次是没有问题的,使用时注意不要混入其它东西。
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问
不同内参差距过大怎么办
bamboopiggy
gapdh大概34,actin 43,tubulin在55以上,这个看你要怎么切你的目的蛋白,一般内参实在不行可以先显一个,然后不好的化,striping了,再加另外一个抗体也可以。
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问
跑蛋白电泳时,loading已经跑到最下面了,但是marker之间的距离有点短,能不能加长电泳时间,蛋白会不会跑出去
balalaLy
就是你的蛋白还没有跑开,不要看loading,看Marker,只要你的目的蛋白没有跑出去就行
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问
新配的转膜液,电泳液,蛋白刚提了一周左右,为什么出现这种情况?请高手帮忙分析,谢谢
balalaLy
蛋白上样之前先55度煮3min,离心机瞬离一下看看有没有改善
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问
细胞样本离心后的沉淀对结果有影响吗
balalaLy
有影响的,细胞裂解后会有比较粘稠的核酸以及细胞碎片,不去掉的话影响跑胶,后面出来的条带会拖尾
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问
求助 膜受体蛋白内参选择
Eason老歌迷
没事就选择这个NaK-ATPase,它不管就是大小的差别,选择内参主要还是看表达量的多少,如果恒定表达,量还大就是个好内参。
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问
同一管抗体,前几次跑出一条带,后面就跑出两条带
balalaLy
蛋白降解或者抗体使用次数多或者用的时候反复冻融都有可能出现多条带的现象
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问
western实验操作
balalaLy
跟着师兄师姐们做几次就能了解wb并不难,熟悉了大概流程了再去找一些资料去看很快就掌握了
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问
求助 WB背景这样 很脏请问会是什么问题造成的
秋秋欣欣
如果排除了封闭液的问题,那可能是你没有洗干净
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问
如何消除对蛋白浓度的影响
balalaLy
选择合适的蛋白裂解液,裂解要充分同时要确保低温操作,防止降解
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问
western操作流程
申东熙老伯
查蛋白的分子量,查蛋白对应的抗体,如果蛋白分子量相差大,就把膜分开孵。
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问
求助|纯化后蛋白断开了
秋秋欣欣
可以减少离子柱与蛋白的结合时间
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