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科研学霸天团,48小时有问必答
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蛋白质点杂交求助!
土井挞克树
我解答一下你关于NC膜的疑问:选择硝纤NC膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜。混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。 另外,由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时使用较温和的Tween20,而且浓度不要
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问
血清和粪便短链脂肪酸检测
balalaLy
Construction of a sustainable 3-hydroxybutyrate-producing probiotic Escherichia coli for treatment of colitis 最近在看的一篇文献里有这方面的,用的LC-MS方法检测
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问
家人们,WB 15%的分离胶怎么配啊 跑16分子量的蛋白,有什么注意事项吗?
土井挞克树
配置浓缩胶,配方参照文章中表格配制即可将上层双蒸水倒去,灌制浓缩胶,插入样品梳;注意:在灌胶的每一步都要注意不要将气泡灌入胶板中,气泡会严重影响最终的实验结果
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问
有什么好的技巧把内参跑的特别齐
土井挞克树
一定在上样阶段谨慎操作,上样时要保证各组蛋白浓度一致,同体积或同质量。同时,小心上样,避免蛋白丢失,即有些蛋白加到槽外。
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问
Irs和pirs蛋白电泳
bamboopiggy
降低胶浓度,我记得这个蛋白分子量过100了,你用8%的胶试试。
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问
蛋白沉淀
明査日月
加百分之十甘油对后续实验不会有影响
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问
慢病毒求助
bamboopiggy
用小鼠的转录本,然后找其中最长的一个就可以。
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问
细胞提蛋白
土井挞克树
你可以试一试,思路和方案可行。
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问
f图里面的入-phosphatase是磷酸激酶吧,那它在这里的作用是什么呢
土井挞克树
这个起催化作用,引起促酶链式反应。
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问
文献看到的图像问一下这个图怎么看,Vcetor代表啥
juyue2010
+号代表含有这个东西,vector是空载体
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问
为什么电泳时内槽电泳液有拉丝,并且内槽电泳液变成乳白色?
土井挞克树
可能是你的电泳槽被硫酸根离子污染
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问
怎么使用Quantity One进行wb条带的灰度分析,特别是怎么去除本底
土井挞克树
Quantity One可以直接进行灰度值的计算,去除本底在开始时可以简化。
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问
我做wb的时候为什么目的条带有两条啊?
土井挞克树
可能是非特异性条带,蛋白纯化不足,胶不合适等原因
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问
GST pull - down assay和免疫共沉淀的区别是什么?
genecreate
GST pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。免疫共沉淀一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。区别是pull-down一般是验证 体外 相互作用;免疫共沉淀一般用于检测细胞水平
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问
免疫沉淀实验能用组织样品做吗?
genecreate
可以的 免疫沉淀实验当然可以用组织样品做
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问
为什么WB的结果是这个样子?是哪一步出了问题
balalaLy
转膜的时候有气泡,以及抗体孵育不均匀。
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问
16KD小分子蛋白的WB实验,一直未跑出来,求大神们指点指点。
土井挞克树
胶配的不好,校正一下胶的比例后再来
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问
细胞WB抗体怎么选
Dr_劉医生
一抗选羊抗,兔抗或者是人源性抗体都可以,得结合文献来确定最后用哪种特异性好,另外单克隆优先
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问
关于脑蛋白western blot
土井挞克树
蛋白纯化不够,上样感觉上的多了。
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问
膜蛋白内参选什么
balalaLy
有一种说法是actin不在膜上面表达,而GAPDH有表达,所以GAPDH会适合一点
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