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wb显影刚开始有,但很快不显示
土井挞克树
一抗浓度太高了,所以背景太高。
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问
网状meta排序结果
Dr_劉医生
如果没错,大概率是你比反了,别把治疗组当作参考ref
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问
这几次做WB都是这样,以前没有这样。各位大佬帮忙分一下原因?
申东熙老伯
没有条带,是不是把蛋白切掉了还是转膜时间太久把蛋白转过了。
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问
wb内参
申东熙老伯
一条一条发光,一起发很可能过曝,再就是蛋白上样量的问题,没调齐,还有可能是转膜时间太久把蛋白转过了。
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问
凝胶层析可以分离血清蛋白吗?
小布丁瑶瑶
可以 首先琼脂糖凝胶可以排除,这是大孔凝胶,用于分子量较大的成分。
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问
超微量核酸检测仪测细菌浓度
balalaLy
很少用这个检测的,一般都用分光光度计
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问
wb湿式转膜时电流大小和胶/膜大小、数量有关系吗,要如何换算,同样的条件跑了两块不同大小的胶结果差异较大,求问?
申东熙老伯
电流大,同样的转膜时间就可能把条带转过。与大小,数量没有关系。
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问
小白求助-提蛋白
NatureBios
这个是和手法有点关系,我们可以讲离心转速设高一些。动作再轻一些
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问
请问跑胶时看到条带整体下移,下面没跑开,可能是什么问题?
balalaLy
你配胶的过程没有问题,上面的marker 也是正常的,所以不存在胶混得不均匀或者没有完全凝这样的问题。下面的蛋白没有跑开只能是胶的浓度太低跑不开。有没有可能你配胶的时候看错了用了低浓度胶的配方
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问
请问做elisa的朋友,有没有遇到移液器头掉的情况?
土井挞克树
有呀,移液器上头的时候用点力,然后选择合适的头。
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问
小分子分泌性蛋白要怎么跑啊,一直跑不出来,好烦啊?
申东熙老伯
提高分离胶浓度,缩短转膜时间。
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问
WB小分子量蛋白曝光问题????
此用户已注销
11kDa分子量蛋白,感觉像有蛋白,因为用的是0.45uM的膜,可以换0.22uM的膜、但是转膜后丽春红染色这地方没看到蛋白。用的是湿转2h,应该可以换成半干转
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问
WB曝光后条带问题,除了背景过深,还有条带全黑。
NatureBios
这次实验有跑内参么,结果如何,全黑考虑 样本是否新鲜 更换封闭体系,延长封闭时间 增加清洗次数 换个一抗
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问
western转膜以后marker很模糊有的条带还转不上是什么原因
NatureBios
在凝胶中marker也模糊么,大概率是上样少了,我们可以增加marker的上样量,浓缩胶到分离胶距离大概1cm,让蛋白压缩在一条线上,转好的膜可以做个丽春红染色,看看转印的效果,转不上的通常是大分子量的,我们可以在转移缓冲液中加入sds
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问
裂解组织后出现粘稠物,电泳时上样孔样品分层而且有残留怎么办?
此用户已注销
RIPA裂解细胞后的粘稠物质主要是DNA,10000g以上离心五分钟就可以沉淀,取上清液。如果一次离心后还有粘稠可重复一次。
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问
WB曝光后背景噪点太高,求大家指点
土井挞克树
背景噪点高是由于 ① 膜封闭时间不够,室温下通常摇床孵育膜 1h,出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间; ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高,可以多设置几组一抗浓度,摸索最适宜的抗体稀释度; ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况,因此实验过程中要注意保持膜的湿润,使用镊子夹取膜。
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问
求问大佬NLRP3相关通路的wb步骤
麻黄连翘赤小豆
NLRP3和Caspase 两个条带显示蛋白有降解,其他蛋白还好,蛋白降解一个是冻融次数多,还有就是保存时间过长,新鲜组织的蛋白一般降解不多,可以重新做后两个蛋白。前面三个蛋白如果不稳定还是看是不是上样时样品不均一,没有摇匀等问题
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问
请问有没有大佬做过NLRP3相关的wb?
麻黄连翘赤小豆
蛋白表达比较低转膜效率低封闭没封好
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问
组织wb之怪异
balalaLy
有没有可能是前两个样品含血液量多,混进了过多的白蛋白?
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问
求助:Wb条带求大神解答
土井挞克树
可能是洗膜的时间和次数不够,延长洗膜时间。
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