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请问友友们,MCAO大鼠血清中的proBDNF具体含量是多少?用Elisa检测前需要稀释吗
土井挞克树
用elisa检测不需要稀释,elisa敏感度很高。微量就能检测出
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问
跑蛋白的时候需要知道目的蛋白的分子量,如何查询目的蛋白的分子量呢?
balalaLy
可以pubmed上查询或者去几个大的试剂商官网找对应的抗体,抗体说明书上有标注分子量大小
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问
wb跑内参有条带丢失
balalaLy
你列举的5点可能的问题中2-5的可能性不大,因为不会这么刚刚好只出现一个孔的条带不见了。很可能是你的蛋白降解或者浓度特别低
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问
IPTG诱导完成后5ml破碎离心取50μl上清加loading buffer后煮沸,还有剩的上清要怎么保存?
balalaLy
如果想做wb的可以加loadingbuffer后煮沸-80度保存,如果不确定还需要用来做什么实验的,可以直接-80度冻存。
3 回答
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问
实验求助 活性氧探针不着色
huarenqiang5
1、可能是细胞活性不好,探针进不去。2、与探针孵育的时候将细胞消化下来试试,同时孵育时定时晃动体系。
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问
用WB检测β-TC-6细胞中amylin可以用GPDH做内参吗
土井挞克树
用WB检测β-TC-6细胞中amylin可以用GPDH做内参
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问
影响PAGE分离STR的因素包括电荷因素吗
大草原的小灰驴
样本有没有用SDS处理,如果已经与SDS反应后,只与分子大小相关,与所带的电荷无关。
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问
coip实验中input组无目的蛋白条带,igG和目的蛋白组有条带是什么原因?
NatureBios
可能的原因是,input组蛋白丰度比较低,CO-IP富集了一下蛋白,更换更灵敏的显影体系,能改善结果
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问
CoIP实验中IgG对照组和目的蛋白组相同位置出现相同数量条带原因?
土井挞克树
可能是清洗的不够干净,所以才会出现相同条带
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问
各位老师想请教一下WB在煮完蛋白上样前是离心取上清还是瞬时离心让样本聚到离心管底部,如果是离心取上清那么这个底下的沉淀又是什么呢
NatureBios
煮完后离心取上清点样,底部可能会有些细胞碎片或杂质,会影响电泳的效果,所以去除掉
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问
检测血清抗体效价的问题
NatureBios
不同模式生物,免疫后IgG表达峰值不固定了(免疫原性的强弱,免疫原的量多少等),针对我们的实验,可以将抗原包被到酶标板上,设计一个时间周期来确定牛的IgG峰值可以参考下( 免疫牛血清中免疫球蛋白的分离制备及功能性质研究)
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问
采集完核酸以后,核酸检测试剂最多能放置多久?
土井挞克树
低温最久48小时,超过48小时会失效,影响检查结果。
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479 围观
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问
各种小鼠胰岛素瘤细胞的特点
土井挞克树
胰岛细胞系RIN细胞系RIN细胞系大鼠胰岛素瘤(RIN)细胞系源于可移植的胰岛细胞瘤。最早的肿瘤是通过大剂量放射线照射近交系NEDH大鼠得到的。从这种肿瘤构建细胞系的过程中建立了两种细胞系:一种是RINr,来源于NEDH大鼠维持的肿瘤;另一种RINm,来源于裸鼠维持的肿瘤。进一步的研究产生了很多亚克隆或源于RIN m,或源于RINr。大部分亚克隆细胞系分泌生长抑素和胰岛素。基于RIN m的RIN
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问
高效液相色谱法C18柱
Dr_劉医生
不能用,不同品系的C18柱因键合方式的不同、粒径的不同、长度的不同,内径的差异等多方面因素,呈现出不同选择性,适用的样本也不一样
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问
血清冻存后能否做ELISA?
huarenqiang5
2 -8 ℃ 可保存 48 小时, -20 ℃ 可保存 1 个月。 -80 度可保存 6 个月。部分标本也可加入适当防腐剂,激素类标本需添加抑肽酶。你这个超过这个时间了一般不建议用,如果标本不能舍弃,建议先做个Elisa预实验看下效果。
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问
高效液相色谱A泵流动相为负压是为什么?有啥影响?
土井挞克树
开始的时候仪器有自检,会抽流动相,有个反压,这个是正常的.
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问
蛋白变性的缓冲盐体系对蛋白电泳或者转膜影响大吗?比如常用PBS或者裂解液稀释蛋白样品,为什么不用TBS
天一湖医者
影响还是很大的。选择合适的缓冲液对于维持一定pH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性很重要。PBS的缓冲能力强于TBS,TBS在pH7.0以下缓冲能力较弱。一般根据实验目的选用合适的缓冲液,如在蛋白纯化中进行阴离子交换层析,阳离子缓冲液首选TBS;阳离子交换层析时,阴离子缓冲液首选PBS。Western blot中使用PBS和TBS均可,根据需要选择合适的浓度。
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问
加Loading Buffer后还能测蛋白浓度吗?
土井挞克树
测不了,LB里的试剂会影响检测的,不准确
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问
做免疫共沉淀时,IP组的igg泳道在对应的目的蛋白位置跟互作蛋白位置,跟IP组泳道同时都有条带,怎么解决? 求教各位大神
huarenqiang5
你这个主要考虑抗体原因导致显影出现了条带。
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问
岛津20—A的高效液相怎么清洗自动进样器管路?仪器关闭状态下,流动相还继续流是为什么?接柱子的地方容易漏液怎么办?
huarenqiang5
使用的流动相应与仪器原保存溶剂能互溶,如不互溶,则先取下上次的色谱柱,照6.1.1-6.1.2的方法用异丙醇冲洗过渡,过渡完毕后,接上相应的色谱柱,换上本次使用的流动相,再按6.1.1顺序操作。色谱流路系统,从泵、进样器、色谱柱到检测器流通池,在分析完毕后,均应按5.1充分冲洗,特别是用过含盐流动相的,更注意先用水,再用甲醇一水,充分冲洗。漏液应请工程师或有经验的维修人员进行检查、维修。
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