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RAW264.7用RANKL诱导破骨细胞的问题
Dr_劉医生
普遍现象,总结经验和文献后可能原因有2个:一是选择RANKL最好是对应RAW细胞株的,鼠源还是人源。二是RANKLE浓度一般是50ng/ml,而且是自身浓度,不是培养基稀释后的浓度。
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问
co—ip两个分子距离很近
balalaLy
1、可以先孵一个stripping后孵第二个,2、一般都是要求正反拉
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问
为什么Wb蛋白样品,上样前需要煮?
huarenqiang5
只有煮沸,才能消除蛋白质的立体二级结构,伸展为一维线性结构,所以一般来讲二聚体都会解体,才能完全按照分子量跑电泳,加的蛋白Marker才有指示分子量的意义!二硫苏糖醇或巯基乙醇可以破坏二硫键,煮加速蛋白质的变性,SDS的存在可以使每个氨基酸带相同的电荷,使整个蛋白呈线性结构。100度煮10min后13000,离心5分钟,取上清电泳,因为沉淀会导致拖尾。也可以取上清到另一管,4度可以放一周备再次电泳
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问
请问WB实验中,CD44蛋白的分离胶应该是多少合适,分子量为82KDa
哎呀呀呀呀哎
不同分离胶浓度与蛋白分离线性范围可以用6%或8%
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问
内参这幅鬼样子
土井挞克树
一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
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问
COIP空白对照组也有和目地条带大小一致的目的蛋白
土井挞克树
上样量不均匀,有的孔上样量大,有的上样量小,所以结果不准确。然后抗体特异度不高,建议更换抗体再跑
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问
中药含药血清滤膜过滤!
土井挞克树
我一般不用这么小的孔径过滤,你可以用0.5的滤膜试一下
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问
请问友友们,MCAO大鼠血清中的proBDNF具体含量是多少?用Elisa检测前需要稀释吗
土井挞克树
用elisa检测不需要稀释,elisa敏感度很高。微量就能检测出
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问
跑蛋白的时候需要知道目的蛋白的分子量,如何查询目的蛋白的分子量呢?
balalaLy
可以pubmed上查询或者去几个大的试剂商官网找对应的抗体,抗体说明书上有标注分子量大小
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问
wb跑内参有条带丢失
balalaLy
你列举的5点可能的问题中2-5的可能性不大,因为不会这么刚刚好只出现一个孔的条带不见了。很可能是你的蛋白降解或者浓度特别低
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问
IPTG诱导完成后5ml破碎离心取50μl上清加loading buffer后煮沸,还有剩的上清要怎么保存?
balalaLy
如果想做wb的可以加loadingbuffer后煮沸-80度保存,如果不确定还需要用来做什么实验的,可以直接-80度冻存。
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问
实验求助 活性氧探针不着色
huarenqiang5
1、可能是细胞活性不好,探针进不去。2、与探针孵育的时候将细胞消化下来试试,同时孵育时定时晃动体系。
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问
用WB检测β-TC-6细胞中amylin可以用GPDH做内参吗
土井挞克树
用WB检测β-TC-6细胞中amylin可以用GPDH做内参
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问
影响PAGE分离STR的因素包括电荷因素吗
大草原的小灰驴
样本有没有用SDS处理,如果已经与SDS反应后,只与分子大小相关,与所带的电荷无关。
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问
coip实验中input组无目的蛋白条带,igG和目的蛋白组有条带是什么原因?
NatureBios
可能的原因是,input组蛋白丰度比较低,CO-IP富集了一下蛋白,更换更灵敏的显影体系,能改善结果
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问
CoIP实验中IgG对照组和目的蛋白组相同位置出现相同数量条带原因?
土井挞克树
可能是清洗的不够干净,所以才会出现相同条带
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问
各位老师想请教一下WB在煮完蛋白上样前是离心取上清还是瞬时离心让样本聚到离心管底部,如果是离心取上清那么这个底下的沉淀又是什么呢
NatureBios
煮完后离心取上清点样,底部可能会有些细胞碎片或杂质,会影响电泳的效果,所以去除掉
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问
检测血清抗体效价的问题
NatureBios
不同模式生物,免疫后IgG表达峰值不固定了(免疫原性的强弱,免疫原的量多少等),针对我们的实验,可以将抗原包被到酶标板上,设计一个时间周期来确定牛的IgG峰值可以参考下( 免疫牛血清中免疫球蛋白的分离制备及功能性质研究)
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问
采集完核酸以后,核酸检测试剂最多能放置多久?
土井挞克树
低温最久48小时,超过48小时会失效,影响检查结果。
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问
各种小鼠胰岛素瘤细胞的特点
土井挞克树
胰岛细胞系RIN细胞系RIN细胞系大鼠胰岛素瘤(RIN)细胞系源于可移植的胰岛细胞瘤。最早的肿瘤是通过大剂量放射线照射近交系NEDH大鼠得到的。从这种肿瘤构建细胞系的过程中建立了两种细胞系:一种是RINr,来源于NEDH大鼠维持的肿瘤;另一种RINm,来源于裸鼠维持的肿瘤。进一步的研究产生了很多亚克隆或源于RIN m,或源于RINr。大部分亚克隆细胞系分泌生长抑素和胰岛素。基于RIN m的RIN
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