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想保证上样量一致，那么调浓度时用什么溶剂稀释蛋白浓度呢？
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问
新手求助啊 提出蛋白 然后呢。然后呢
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问
请问可以在哪儿查到WB的目的蛋白大小
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问
分子量27kd的 NGF的显色时间
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问
动物实验 WB 标本数量如何选择？为什么？
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问
谷胱甘肽标签蛋白包涵体纯化方法？
一乐到底
我也是使用GST标签蛋白，用全式金蛋白纯化方法，试剂盒要求过柱纯化前先变性再复性，在尿素透析复性过程中一直出现沉淀，请问怎么解决
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问
western Blot 检测心肌中，模型大鼠处死后取心肌组织，怎样提取细胞蛋白？
fmmuzhangfuyang
1.大鼠处死后剪取心脏，迅速用4摄氏度预冷PBS洗净血液，液氮速冻后移置负80摄氏度冰箱冻存2.提取时按照每毫克组织加入100ulRIPA裂解液，然后机械匀浆，12000r/min离心抽取上清，按照体积比1:4加入5乘loading buffer，95度10min，即可用于WB检测3.其余无特殊按照WB步骤进行
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问
为什么一定要加內参？有的样品里如尿液中蛋白分析无合适內参怎么办？
alaling
加入内参是为了消除外部操作产生的差异。比如你需要加样1ul，你能保证枪加入的就一定准确的是1ul吗？枪尖随便挂个0.1ul和不挂，差别就有10%。尿液里的蛋白如果没有合适的内参，可以考虑以添加外参的方式进行，就是在每个样品里面添加已知量的某种纯蛋白。当然，如果用纯体积或纯样品量进行参比也是可以的。最重要的是要参考文献，看看大部分人是如何处理这种问题的。
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问
为什么 Odessy 扫描后发现有的地方有蛋白，有的就是空白一片？
应用场景
是不是有可能转膜出现了问题？
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问
分子生物学
我是金博士
这个你要查一下文献，一般会有破碎条件。然后摸索一下，就可以了。
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问
WB内参总是跑不齐
应用场景
我可能您选用的内参表达不稳定，需要换内参，或用总蛋白做内参
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问
求问各大神，WB 跑出来的带子连成一条直线是怎么回事？
joson12345
样品制备的问题，如果样品粘稠的话，用全能核酸酶处理一下。
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问
WB 上样量怎么计算?
论文菌
最大浓度x对应体积再➗最小浓度就是最大浓度对应的体积，然后总体积再减去当前体积，等于需要稀释的体积。
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问
封闭液的机理？
我是金博士
根据的就是相似相溶，不相似不相溶，封闭液，一般选异丁醇，实在不行，也可选乙醇。
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问
为什么膜需要减成多段？
鹏21PE
不同蛋白大小不同，膜剪成多段可以同时孵育多种抗体。
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686 围观
1 回答
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问
我用的预染marker，转膜时发现完全没有转到膜上，但是胶上也没有marker，这是什么原因呢？
我是金博士
1、这个正常，转膜结果到底如何需要染膜来看膜上的蛋白 2、不能这样来确定 3、这个很奇怪，没碰到，看看你做的三明治是否成功，仪器是否有问题 4、与电压之类是有关系，但是不应该2个泳道的marker，一好一坏
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问
请问 SDS-PAGE 实验中出现拖尾的现象是什么原因？
极客医生
marker很清晰，胶应该是没有问题的。样品有问题，可能是蛋白样品发生降解，在上样之前，要把蛋白样品在100度煮几分钟，变性失活。同时改变一下上样量，一次性不要太多。用新鲜样品，最好现煮现跑。
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问
半干转是否要求膜，滤纸，胶同样大小？
tao0129
可以相等，但是如果纸、膜比凝胶大就比较容易形成短路了，上下两层虑纸也不能因过大而相互接触，这样同样会短路，电流不会通过胶和虑纸。转移前和转移过程中看看电压就行，正常的半干是慢慢变高的， 最后结束时一般是开始的1.5~3倍都是正常的。一般Buffer和滤纸选的对就不会短路。
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问
使用磁珠拉蛋白，会不会使蛋白彻底降解掉？
wyf-525
有就是有，没有就是没有，我们实验室很多人都用不加抑制剂的裂解液洗，只要你的速度赶上蛋白变性的速度就行。
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问
山羊抗人的单克隆抗体可以直接注射到小鼠体内吗？
我是金博士
山羊抗人的单克隆抗体，这个是二抗，主要用来结合一抗的，跟你描述的不一样。
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