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        怎样检测引物是否合成的好?

        相关实验:长片段PCR实验

        user-title

        LetitgoE27S

        怎样检测引物是否合成的好?

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        3 个回答

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        一般按如下条件检测

        a

        溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为pcr产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,mirna染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附件

        b

        琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时pcr产物在100bp一下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50bp左右,条带弥散,暗。

        c

        扩增曲线呈“s”形,一般情况下,s形越陡,扩增效率越高,s形越平,扩增效率低。有时会出现扩增曲线只有线性期,没有指数期的情况,这时一般扩增效率较低,建议检测一下扩增效率,用标准曲线法计算相对表达量。染料法的扩增曲线比探针法的扩增曲线要好看。

        d

        样品ct值小于30,对于ct大于30的情况,建议重新设计一对引物,重新调试。如果几对引物的ct值都较大,可以适当放宽ct至35。但是ct值肯定不能大于35。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        引物合成前是有设计图的,合成后需要与原图对比,也有专门检测的网站。

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        有引物合成报告,或者进行扩增后,测序检测

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