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        细菌质粒构建如何确保准确

        相关实验:单分子 PCR

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        洛噜啦噜啦嘞

        qPCR引物现在是想用qRT-PCR验证16srRNA测序的优势物种的结果,引物是找的文献中的,但是引物blast结果是种水平上的很多,是不是能代表属水平上的保守序列。

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        4 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        保存质粒用的菌宿主需要小心选择,因为有不少菌株已经工程化,有些缺失了某些纠错系统,有些则还保留着重组体系。典型的是最好不要用表达载体保存质粒,如BL21(DE3)就不适合,由于其没有缺失重组酶RecA。具体可以看各菌株的基因型。常用于保存质粒的菌株有DH5a, XL1-blue, TOP10等。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        目前构建质粒的过程主要分为以下几个步骤:1.引物设计,2.PCR,p出目的片段,3.酶切,4.连接,5.转化,涂板,6.挑菌,小提,7.酶切验证并测序,8.质粒中提。图片描述质粒载体的制备既可以选择单酶切也可以选择双酶切,一般推荐使用双酶切。其实目的就只有一个,尽量使载体的末端具有特异性,防止自连。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        是,如果blast在种水平上找到很多,可以认为是属水平上的保守序列。

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        汤姆卜丽波

        有帮助

        不完全可以,还要进一步验证才行

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