• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        片段很大,约6kb,用了很多高保真酶都p不出来(kod, la taq等),请问还有什么好用的酶推荐吗?

        相关实验:长片段PCR实验

        user-title

        李小亮亮

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        保真性最最强的就是Pfu Ultra 2

        user-title

        未来9

        有帮助

        对于长片段, Taq酶具有较高的错误率,导致产物3’端出现错配碱基,DNA合成提前结束。这时应该使用一些错配率更低的耐热聚合酶,如klentaq、pfu、rTth、Vent等。从不同文献中可以得到使用双酶系统更有利于长片段DNA的合成。

        Taq酶在PCR的过程中活力下降,会增加非特异扩增以及二聚体的出现。这时应该使用缓冲能力较强的缓冲液,使缓冲液的pH值不会降得过低而影响酶活性;也可在PCR体系中添加一些促进剂,以降低退火温度或/和提高聚合酶的稳定性,从而促进长片段扩增的进行;也可稍微降低变性温度,以保证聚合酶的活性。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        试试LA-pcr,或者做融合pcr试一下

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        别考虑什么好的酶,而是考虑你的片段有点大,你分段克隆,然后拼接起来不会好一些。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序