细菌QPCR相关问题请教

你提取的RNA肯定是有问题的，不单纯是纯度的问题，你最好使用试剂盒来提取，简单还能保证提取质量，可以用天根的试剂盒。

理想的内参基因应该满足以下条件：

1.不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因DNA的扩增；

2.高度或中度表达，排除低表达；

3.稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显著性差别；

4.表达水平与细胞周期及是否活化无关；

5.其稳定的表达水平与目标基因相似；

6.不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响。

在进行RT-qPCR实验之前，必须正确选择内参基因。那么在选择内参基因时，可以通过geNorm、BestKeeper、NormFinder、RefGenes 等工具来评估，这是保证结果可靠准确的前提。其次可对候选的内参基因进行qPCR 实验做进一步的筛选。首选在不同样本中均稳定表达的内参基因，即比较各样品中Cq平均值以及Cq值的标准偏差，选择SD最小的基因作为实验内参。