引物间形成二聚体怎么办？

1、不能重新设计就试试降低一下引物浓度，调整一下体系如优化镁离子浓度或改变模板量。除此之外，形成引物二聚物的原因很多，如聚合酶是否活化，还有program，退火温度太高，时间太短，延伸时间太短都可能是原因。2、把循环中的退火温度提高，避免二聚体的形成。必要的时候，做两步PCR——退火和延伸都在70或72度进行。3、在设计引物时，在上下游引物的5'端加上序列一样的寡核苷酸尾巴，使得PCR进行到第三个循环时引物二聚体产物会自身退火形成发卡结构而阻碍继续扩增。4、考虑一下用热启动Taq酶吧，我记得好像QIAGEN 和Invitrogen都有一种HotStarTaq DNA polymerase, 该酶在室温时是没有活性的，必须95度15 min进行热激活，这样在热激活的时候使室温配PCR反应体系时引物形成的二聚体解链，接下来直接进入PCR，形成引物二聚体的机会就少多了。值得一试，只是该酶比较贵。5、使用booster PCR.尽量降低引物浓度，使引物和模版的浓度比降下来，提高模版对引物的竞争力。