双切酶体系中，两个酶的温度不一样，30和37该如何选择呢？

先选择酶切低温要求的，再去酶切高温要求的

那就分开切，就是多做一步，繁琐一点。

可以先用其中一个酶切了，然后直接过柱回收，再用另外一个酶切就可以了。

30-37度都可以，没问题。一般有星活性的酶都不担心切不开，而是担心切多了

1、BamHI和XhoI都是常用酶，比较便宜，可以换一家公司买。至少Fermentas和NEB的BamHI都是37度的。

2. 分布酶切。单酶切，跑胶回收，再另一个单酶切。这要求你的DNA template多一点，比如质粒或者PCR产物。

两种酶温度相差不多应该都可以的，实在不行首先用低温的酶先切,切完后抽提,抽提完后用高温的酶再切.