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实验问答25,220,704 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

DNA

问求助帖：slot blot 和dot blot的区别和原理

Eason老歌迷

斑点杂交dot blot是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜（或尼龙膜、NC膜）上，用已标记的探针进行杂交，洗膜（除去未接合的探针），放射自显影，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。狭缝斑点slot blot，也是广义dot blot的一种。

2 回答3185 围观

问转染两个重链质粒进细胞会怎样？

Eason老歌迷

两种质粒混了没有影响。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在，两种质粒混了没有影响，只是不相容。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在，当两种质粒同时导入同一细胞时，它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争。在一些细胞中，一种质粒占优势，而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后，占少数的质粒将会丢失，因而在细胞后代中只有两种质粒的一种，这种现象称质粒

1 回答843 围观

问请问，一个质粒里有2个CMV启动子，那它后面的基因都可以表达吗？

bamboopiggy

对都会表达，但是我感觉其中一个的cmv启动子可能在抗性基因上。

2 回答1105 围观

问小鼠空肠Il-1β的表达情况

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是你的上样量的问题，二个是你的上样顺序有没有错误，三个是你的模型是否成功，四个是你的实验次数，可以做三个重复看看情况。

2 回答488 围观

问求助各位大佬，纯蛋白过离子交换柱前平衡柱子时为什么要用高低盐平衡？为什么要降盐啊？

Eason老歌迷

有利于纯化啊。不同的离子团跟柱胶的结合能力不同，盐梯度洗脱可以使结合能力不同的离子团逐步洗脱，常用于不同蛋白的分离纯化。

1 回答700 围观

问请问细胞杀伤肿瘤效果，除了用荧光素酶检测荧光强度，还需要用LDH和CCK8来检测杀伤效果吗？

bamboopiggy

有一个能说明问题就好。但是多种方法说明一个问题，更solid

2 回答656 围观

问求助！！！免疫共沉淀洗珠子时的去污剂SDS浓度范围

balalaLy

我用的buffer的配方一种是1%NP40+0.1%SDS或者只有1%NP40

3 回答446 围观

问求助各位大神，帮我看看qpcr扩增曲线太奇怪了，有负的荧光信号，但是溶解曲线是好的，

Eason老歌迷

你这是有溶解曲线，无扩增曲线。可能是反应程序问题，扩增阶段未收集荧光信号。建议你检查程序设置。

3 回答408 围观

问腺病毒纯化介质氯化铯梯度的配置浑浊？

Eason老歌迷

是不是溶剂的问题，你过滤一下试试看。

1 回答529 围观

问天根质粒小提试剂盒的PD溶液怎么配？

Eason老歌迷

去蛋白液PD，一般是含异丙醇（可能50%）和sds等去污剂的水溶液。但是人家试剂公司的试剂盒里的溶液应该不会告诉你具体配方吧。

2 回答1599 围观

问ROS检测

whilt-shirt

有可能是高浓度导致细胞全死了导致的

2 回答1517 围观

问离子交换时为什么要降低盐浓度啊

Eason老歌迷

1、低盐可促进蛋白盐溶；2、低盐可使与层析柱吸附弱的杂蛋白穿透层析柱，可能增加洗脱液的目标蛋白纯度，或增加层析柱对目标蛋白的载量。

2 回答1558 围观

问想问一下各位大佬，离子交换过程中，为什么要降低盐浓度啊？？

Eason老歌迷

1、低盐可促进蛋白盐溶；2、低盐可使与层析柱吸附弱的杂蛋白穿透层析柱，可能增加洗脱液的目标蛋白纯度，或增加层析柱对目标蛋白的载量。

2 回答561 围观

问等电聚焦电泳

丁香清香

等电聚焦电泳的详细讲解：https://www.biomart.cn/experiment/430/465/471/16149.htm https://www.bilibili.com/video/BV15L4y1q7B1?spm_id_from=333.337.search-card.all.click

1 回答729 围观

问EMSA实验求助谢谢大家

Eason老歌迷

看不到shift带可能是标记的DNA探针量太少或者探针有降解。某些蛋白和探针的结合条件比较特殊，需要优化结合体系。蛋白样本提取质量不高，蛋白降解或者提取量不足。样本中没有可以与探针结合的蛋白。探针与蛋白无特异性的相互作用。转膜效率低，蛋白或者探针未转移到膜上。

1 回答630 围观

问扩增曲线出现这种问题是什么原因

Eason老歌迷

可能是你的PCR参数设置错误。可能是你的模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。可能是你的引物或者探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。

3 回答222 围观

问蛋白电泳问题

bamboopiggy

你蛋白浓度感觉有点低，浓缩胶有点短，没把条带压好

3 回答456 围观

问一代测序引物和PCR扩增引物的区别？

Eason老歌迷

测序引物分自带引物和通用引物，自带引物为客户自行设计的PCR扩增引物或者载体及目的片段上设计的引物进行测序。PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端。

3 回答1352 围观

问琼脂糖PCR凝胶电泳失败求助

balalaLy

这种涂抹状的条带一般是样品降解了

3 回答426 围观

问重组质粒电转入植物乳杆菌

Eason老歌迷

如果说P了但没有P出来条带，大概率就是没转进去。你这个可能是时间太短的原因，因为我看你感受态制作的没啥问题。

1 回答1411 围观

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