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科研学霸天团,48小时有问必答
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求助!!!免疫共沉淀洗珠子时的去污剂SDS浓度范围
balalaLy
我用的buffer的配方一种是1%NP40+0.1%SDS或者只有1%NP40
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问
求助各位大神,帮我看看qpcr扩增曲线太奇怪了,有负的荧光信号,但是溶解曲线是好的,
Eason老歌迷
你这是有溶解曲线,无扩增曲线。可能是反应程序问题,扩增阶段未收集荧光信号。建议你检查程序设置。
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问
腺病毒纯化介质氯化铯梯度的配置浑浊?
Eason老歌迷
是不是溶剂的问题,你过滤一下试试看。
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问
天根质粒小提试剂盒的PD溶液怎么配?
Eason老歌迷
去蛋白液PD,一般是含异丙醇(可能50%)和sds等去污剂的水溶液。但是人家试剂公司的试剂盒里的溶液应该不会告诉你具体配方吧。
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问
ROS检测
whilt-shirt
有可能是高浓度导致细胞全死了导致的
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问
离子交换时为什么要降低盐浓度啊
Eason老歌迷
1、低盐可促进蛋白盐溶;2、低盐可使与层析柱吸附弱的杂蛋白穿透层析柱,可能增加洗脱液的目标蛋白纯度,或增加层析柱对目标蛋白的载量。
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问
想问一下各位大佬 ,离子交换过程中,为什么要降低盐浓度啊??
Eason老歌迷
1、低盐可促进蛋白盐溶;2、低盐可使与层析柱吸附弱的杂蛋白穿透层析柱,可能增加洗脱液的目标蛋白纯度,或增加层析柱对目标蛋白的载量。
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问
等电聚焦电泳
丁香清香
等电 聚焦 电泳的详细讲解:https://www.biomart.cn/experiment/430/465/471/16149.htm https://www.bilibili.com/video/BV15L4y1q7B1?spm_id_from=333.337.search-card.all.click
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问
EMSA实验求助 谢谢大家
Eason老歌迷
看不到shift带可能是标记的DNA探针量太少或者探针有降解。某些蛋白和探针的结合条件比较特殊,需要优化结合体系。蛋白样本提取质量不高,蛋白降解或者提取量不足。样本中没有可以与探针结合的蛋白。探针与蛋白无特异性的相互作用。转膜效率低,蛋白或者探针未转移到膜上。
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问
扩增曲线出现这种问题是什么原因
Eason老歌迷
可能是你的PCR参数设置错误。可能是你的模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。可能是你的引物或者探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。
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问
蛋白电泳问题
bamboopiggy
你蛋白浓度感觉有点低,浓缩胶有点短,没把条带压好
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问
一代测序引物和PCR扩增引物的区别?
Eason老歌迷
测序引物分自带引物和通用引物,自带引物为客户自行设计的PCR扩增引物或者载体及目的片段上设计的引物进行测序。PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,分为两种,引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端。
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琼脂糖PCR凝胶电泳失败求助
balalaLy
这种涂抹状的条带一般是样品降解了
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重组质粒电转入植物乳杆菌
Eason老歌迷
如果说P了但没有P出来条带,大概率就是没转进去。你这个可能是时间太短的原因,因为我看你感受态制作的没啥问题。
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问
关于RIP求助
Eason老歌迷
是不是你的实验步骤有问题。细胞核分离和裂解物沉淀为避免污染,使用不含 RNA 酶的试剂。染色质剪切应该在液氮中冷冻一份裂解物用于对照 RNA 分离。根据所关注的蛋白质和抗体,加入的抗体量和孵育时间可能需要进行优化处理。
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凝胶电泳结果如图所示该怎么办
Eason老歌迷
你这是有点亮带拖尾。可能是你的引物设计不佳,也可能是PCR中DNA浓度加的太多,也可能是mg2+浓度加的太高。
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RNA提取液(25:24:1,PH<5.0)的提取效果及使用方法
Eason老歌迷
rna提取液的提取效果很好,具体使用方法和trizol法差不多。苯酚使蛋白质变性,同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提加速有机相与液相分层,去除核由于苯酚与水有一定比例的互溶,所以如果使用非饱和酚,样品中的水分会进入酚相,样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚,这些残留的酚会抑制后续酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点,因为它已经提前充分吸足了水分(饱和酚中含10%左右的水分),因此不会丢失样品
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RNA提取后跑电泳发现加样孔发亮是有蛋白污染吗?该如何解决,已少取上清
bamboopiggy
蛋白污染,你加氯仿以后,吸上清的时候,就吸400ul,足够提rna了,这样接触不到那个蛋白质的小白片。
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【求助】电镜大组织块固定太久
bamboopiggy
能切,但是最好用靠近戊二醛的外层的,怕内层的渗透不好
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小鼠离体心脏灌流
bamboopiggy
你的实验目的是什么呢?根据你的实验目的来决定什么时间加CaCl2
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