请问CRISPR实验中，crRNA和tracrRNA一直不能结合成双链是什么原因呀？

看文献中是95℃下5min后退火到室温，但是我跑胶发现没有出现新的条带，相同条件下单独的RNA对照组crRNA好像降解了（取相同体积但跑胶无条带），buffer用的IDT的nuclease free duplex buffer，跑过琼脂糖和非变性PAGE胶，但结果都不理想。请问有大佬做过这样的实验吗？不知道原因出在哪里了，感谢指教！