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纯化好的蛋白放-40℃冰箱一段时间后,拿出解冻,发现有白色絮状沉淀物,请问这是什么原因导致的,蛋白还能用吗,能用要怎么处理沉淀?

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日日为新

用PBS作为蛋白储存液保存蛋白

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3 个回答

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小小翻车鱼

有帮助

白色絮状沉淀物可能是由于PBS缓冲液中的盐类结晶所致。这种情况下,蛋白质可能仍然可以使用,但需要进行一些处理。

首先,将蛋白质样品离心,去除上清液中的沉淀物。然后,可以使用滤器或者离心管等工具将蛋白质样品过滤或离心,去除残留的盐类结晶。最后,可以重新调制PBS缓冲液,并将蛋白质样品溶解在其中。

需要注意的是,如果蛋白质样品的结晶较为严重,或者出现了其他异常情况,建议重新制备蛋白质样品。此外,在保存蛋白质样品时,可以考虑添加一些保护剂,如甘油、PEG等,以减少结晶的发生。

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日日为新user-title

好的,非常感谢您的回答,那请问如果加甘油的话,是加百分之几浓度的甘油,加的量是多少呢

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小小翻车鱼

通常,甘油浓度在5-10%之间,可以使用以下方法:

1. 将甘油与PBS混合以制备储存液。例如,可以按照以下比例混合PBS和甘油:90% PBS(或适当缓冲液)和10%甘油。可以根据实际需要调整甘油的浓度,但通常不建议超过10%。

2. 加入量:根据储存蛋白的体积来确定甘油的加入量。例如,如果需要储存1 mL的蛋白质样品,可以加入0.1 mL的10%甘油/PBS溶液。加入适量的甘油,以确保蛋白质储存液的总体积保持恒定。

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huarenqiang5

有帮助

可能是蛋白溶解后析出沉淀,建议融化时先放4°,然后恢复到室温,温度不宜发生剧烈变化,可以进行摇床轻轻摇晃,或可加点5-10%的甘油助溶。

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高山云初

有帮助

 

镍柱纯化后的目的蛋白,一般都需要透析或过分子筛G25(如果透析目的蛋白沉淀的话)将盐去除,否则目的蛋白经过冻融后会出现沉淀,特别当目的蛋白浓度很高的情况下。在你确认甘油不会影响您蛋白测活等后续实验的前提下,您可以添加甘油。

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