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        蛋白质分离纯化过程中各种缓冲液如何配制

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        远方_oe7m

        1、匀浆缓冲液(200 mM TrisHCl150 mM                NaCl10 mM EDTApH 8.0

        2、TrisHCl缓冲液(50 mMpH 8.0

        3、20 mM  NaH2PO4( pH 7.2 )500 mM NaCl

        4、含有1mM PMSF1mM cocktail50mM Tris–   HCl缓冲液(pH 7.4

        5、缓冲溶液中NaCl0400mM递增的洗脱溶液

        以上各种溶液配制需要准备什么原材料,怎么使溶液pH达到要求?

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这些缓冲液的配制主要涉及到以下化学物质:Tris,盐酸,NaCl,EDTA,NaH2PO4,PMSF和protease inhibitor cocktail。下面是每种缓冲液的具体配制方法:

        1. 匀浆缓冲液:先在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris和NaCl,再加入EDTA。之后使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到8.0。所有物质应配成最终浓度为200 mM Tris-HCl,150 mM NaCl和10 mM EDTA。

        2. Tris-HCl缓冲液:在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris,使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到8.0。Tris的最终浓度应为50 mM。

        3. 20 mM NaH2PO4,pH 7.2, 加 500 mM NaCl:首先在适当体积的去离子水中溶解适量的NaH2PO4和NaCl,然后使用氢氧化钠或者盐酸调整pH到7.2。NaH2PO4和NaCl的最终浓度应为20 mM和500 mM。

        4. 含有1 mM PMSF、1 mM cocktail的50 mM Tris-HCl缓冲液 (pH 7.4):首先在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris,然后使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到7.4。Tris的最终浓度应为50 mM。最后在这个溶液中溶解适量的PMSF和protease inhibitor cocktail,使得它们的最终浓度都为1 mM。

        5. 缓冲溶液中NaCl从0到400 mM递增的洗脱溶液:这通常是一系列的缓冲液,每种缓冲液的NaCl浓度都比上一种稍高一些。配制这些缓冲液时,可以首先配制一种NaCl浓度为400 mM的缓冲液,然后适当稀释这种缓冲液以得到不同NaCl浓度的其他缓冲液。

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        需要准备对应的干粉溶剂,用浓盐酸调ph

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        Tris-HCl缓冲液的配制方法:

        使50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml即可配置成功。

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