肝脏细胞与肌肉体外如何共培养？

共培养步骤：

1. 将40-60ul的肌肉细胞悬浮液种到slide中间小室，密度控制在5-10×104cells/ml；

2. 将40-60ul的肝脏细胞悬浮液种到slide的其他8个小室；

3. 细胞贴壁后，移去各小室培养基，并洗脱掉未贴壁细胞，再加400-600ul培养基到大well，两种细胞共享同一培养体系。

可以按照以下步骤进行肝脏细胞与肌肉细胞的共培养：

1. 细胞获取：

• 肝脏细胞：这些通常从供体肝脏获取，然后进行机械和酶水解分离，得到初代肝脏细胞。

• 肌肉细胞：通常从肌肉生物活检样本获取，然后进行类似的处理来分离初代肌肉细胞。

2. 细胞清洗与分离：使用离心机，以去除细胞中的不必要的细胞碎片和组织。

3. 细胞培养：

• 两种细胞类型需要在各自的特定培养基中进行培养。培养基通常含有必要的营养素、生长因子和抗生素。

• 细胞需要在湿润的、37℃、5%CO2的环境中进行培养。

4. 共培养：

• 共培养最常用的方法是使用特殊的共培养设备，如透明的微孔膜，这样可以防止两种细胞类型直接接触，但允许生长因子和细胞因子在两种细胞间自由传递。

• 另一种选择是使用微流控芯片，这种设备可以模拟体内的微环境，允许更精确的控制共培养条件。

5. 观察和分析：根据实验目标，可能需要进行的分析包括但不限于显微镜观察、细胞计数、活性测试、细胞标记以及各种生物化学和分子生物学分析。

细胞共培养方法主要包括直接接触共培养、间接接触共培养和三维细胞共培养。

1、直接接触共培养

在合适的条件下, 将2种或2种以上细胞按照一定比例共同培养在同一培养皿中。

适用于体内邻近的组织细胞以及2种生长状态相同的细胞，主要用于研究细胞间相互作用以及诱导细胞分化。

2、间接接触共培养

①条件培养基共培养法：用培养过一种细胞的培养基培养另一种细胞，2种细胞不直接接触，而细胞因子可以交流，其优点是可以消除目的细胞对条件细胞的影响，突出条件细胞对目的细胞的作用。

②“爬片式”共培养法：将一种细胞先接种在处理后的玻片上，待细胞贴壁后，以一定比例放入另一种细胞的培养皿中与其共培养。

③嵌入式细胞共培养法（Transwell小室）：Transwell小室是一类有通透性的杯状装置, 杯子底层放一张有通透性的膜,一般常用的是聚碳酸酯膜,孔径大小有0 .1～12 .0 μm。将Transwell小室放入培养板中, 细胞A种在上室内,下层种植的细胞B培养液中的成分可以影响到上室内的A细胞,从而可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A生长、运动等的影响。