vp实验及甲基红实验的注意事项

VP试验注意事项:

牛肉浸汤不能用于本试验，因在肌肉浸出物中含有乙酰甲基甲醇、丁二酮以及其它干扰试验的物质，可造成假阳性。

V-P 试验阳性菌偶尔也会不出现阳性反应，为避免这种情况，可将加有试剂的培养物于 50℃ 左右轻微加热，阳性菌即出现红色，而真正阴性菌仍保持原色。

在通用培养基中，一般培养 1-3 天多数能出现阳性反应，培养时间过长，可因产酸而使 V-P 反应减弱或造成假阴性。

一般来说，V-P 试验和甲基红试验多呈相反结果。但应注意，这也不是绝对的，有少数细菌如蜂房哈夫尼亚菌（Hafnia alvei）和奇异变形杆菌有时两试验均出现阳性反应。

本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基甲醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。

关于 V-P 试验培养物的培养温度，一般多采用 35℃ 或 37℃，但日本有学者认为 37℃ 培养常使分解乙酰甲基甲醇的酶失去活性，故主张采用 28-30℃ 培养，夏季可培养于室温。已知有少数细菌，如哈夫尼亚肠杆菌，在 37℃ 培养的 V-P 试验结果常不稳定，需在 25-30℃ 培养，才能获得可靠结果。

VP实验注意事项：

1.保证试剂的新鲜度：试剂的质量对实验结果具有重要影响。使用新鲜的巴拉特试剂A（α-萘乙醇）和巴拉特试剂B（40% KOH溶液）。

2.掌握试剂的添加顺序：先加入试剂A，再加入试剂B。注意不要将试剂混合后一起加入。

3.加入试剂后摇匀：试剂加入后要摇匀，然后等待一段时间（通常约15分钟）观察颜色变化。

4.观察时间：颜色变化可能在几分钟到1小时之间出现，因此需要密切观察。结果的判断以红色为阳性，无变化为阴性。

甲基红实验注意事项：

1.保证甲基红指示剂的新鲜度：甲基红的质量对实验结果具有重要影响。使用新鲜的甲基红指示剂。

2.使用适当浓度的甲基红溶液：通常使用0.1%甲基红溶液。过高或过低的浓度可能导致颜色判断困难。

3.观察颜色变化：将甲基红加入培养物后观察颜色变化。红色表示阳性（混酸发酵），黄色表示阴性（无混酸发酵）。

4.控制甲基红加入量：加入适量的甲基红，避免加入过多影响观察。通常加入约0.5ml甲基红溶液到5ml培养物中。

做vp实验需要注意滴加VP试剂甲液和乙液后需摇匀，静置10min后才能看到红色化合物出现。不可心急