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        请问悬浮细胞怎么做LDH检测呀?我们这没有96孔板离心机,一吸上清把细胞也吸上来了

        user-title

        hmz2VLK


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        2 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        可以等细胞静置后,轻拿轻放,然后轻轻吸取上清,不要吸干,这样细胞大部分都还在底部,或者是进行离心。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一个可行的方案,适用于悬浮细胞的LDH测定:

        材料:

        悬浮细胞样品

        LDH检测试剂盒

        1.5mL离心管

        微量离心管

        离心机

        移液管

        步骤:

        取约1x10^6个悬浮细胞,并用PBS洗涤一次,以去除培养基中的血清蛋白和其它蛋白质。将细胞悬浮于1ml培养基中。

        将细胞分配到两个1.5mL离心管中,每个离心管中约有500,000个细胞。

        将一份样品暴露于室温下30分钟,作为正对照组,使细胞膜完全破裂并释放LDH。

        将另一个样品与同等体积的LDH反应液混合,作为实验组。

        将两个离心管离心5分钟,以去除细胞碎片和其它颗粒物。

        将每个离心管中的上清移至微量离心管中,再离心5分钟以去除残留的细胞碎片。

        将上清液分别移至96孔板中的相应孔中。

        加入LDH底物,并按照检测试剂盒的说明进行反应。

        在反应结束后,用酶标仪测量吸光度,并计算LDH释放量。

        注:实验中可以采用同样的细胞数来进行对比。在第3步中,应该将细胞完全破裂并释放LDH,以确保正对照组的LDH释放量最大。同时,在样品处理过程中应该避免细胞受到额外的机械刺激或振荡,以免影响实验结果。

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