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哪位大佬可以分享一下血吸附实验的具体操作步骤?万分感谢!

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dxy_ar66bxo2

主要讲一下选什么指示细胞以及阳性对照选什么病毒?

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2 个回答

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土井挞克树

有帮助

方法
1.2.1待检样品制备
将待检细胞经无抗生素培养基传1代,取三天未换液的且已长成单层的细胞,反复冻融3次,1000rpm离心15min除去细胞碎片,收集上清液,过滤除菌后即为待检样品。悬浮培养型细胞直接冻融后离心,同法制备待检品。
1.2.2 接种培养
1) 致细胞病变试验
二倍体细胞、Vero细胞以及与待检细胞同种属同组织类型的细胞,每组细胞6瓶,每瓶20ml,每瓶接种待检样品3ml。于5%CO2培养箱36℃±1℃培养21d。同时设立细胞阴性对照和阳性对照。阳性对照接种100μl稀释至10-3的脑心肌炎病毒。在培养过程中每7天进行传代,期间根据细胞生长情况更换细胞培养液。显微镜下观察并记录是否有细胞病变出现。
2) 血吸附试验
在观察期的第7d、14d和第21d,分别取2瓶细胞,弃去细胞培养液,用无钙镁PBS将细胞单层轻轻冲洗3遍。加入20ml的豚鼠红细胞和鸡红细胞混合悬液(加入前应混匀),使之均匀的覆盖在细胞单层上。加入红细胞悬液后将细胞单层置2~8℃ 30min,然后置20~25℃ 30min,然后用PBS轻轻冲洗3遍分别进行镜检,观察并记录细胞单层红细胞吸附情况。
1.2.3 结果判定
1)致细胞病变试验
阳性对照应出现典型的细胞病变;阴性对照应无任何细胞病变出现。接种待检样品的细胞组均不出现任何细胞病变,则待检细胞致细胞病变试验判为阴性。
2)血吸附试验
阳性对照应出现红细胞吸附,阴性对照应无红细胞吸附。接种待检样品的细胞组均不出现红细胞吸附,则待检细胞血吸附试验判为阴性。
3)观察期内接种待检样品的细胞组细胞形态正常、致细胞病变试验阴性且血吸附试验阴性,则待检细胞无病毒外源因子污染,判为阴性(—);若观察期内接种待检样品的细胞组中任一细胞出现致细胞病变试验阳性或血吸附试验阳性时,则待检细胞存在外源因子污染,判为阳性(+)。

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loveliufudan

有帮助

血吸附实验是一种常见的生物分离和纯化技术,常用于分离和纯化蛋白质、病毒等生物分子。根据您的问题,我将为您介绍血吸附实验的操作步骤以及指示细胞和阳性对照的选择。

操作步骤:

准备工作:制备所需试剂和设备,如包括需要进行血吸附的吸附材料、适当的缓冲液、离心管、离心机等。

加样:将需要进行血吸附的样品与适当的缓冲液混合均匀,然后加入血吸附材料中。

血吸附:将混合物在适当条件下孵育一定时间,使目标分子与血吸附材料发生特异性结合,从而被分离和纯化。

洗脱:将血吸附材料从孵育混合物中分离出来,并用适当的缓冲液进行洗脱,以去除非特异性结合的杂质。

分析:将洗脱物用于后续分析,如Western blot、ELISA、免疫沉淀等技术,以检测目标分子的纯度和活性。

指示细胞和阳性对照的选择:

在血吸附实验中,指示细胞和阳性对照的选择应根据具体实验的目的和样品特性进行选择。

指示细胞的选择通常应考虑其对目标分子的特异性结合能力和生长状态。常用的指示细胞包括HEK293T、CHO、COS-7等细胞系。

阳性对照的选择应考虑到目标分子的特异性和丰度。如果目标分子已经被纯化和鉴定,可以将其用作阳性对照。如果目标分子还未被纯化,可以通过Western blot等技术检测样品中的目标分子是否存在,以确定阳性对照。

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