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        各位大神,有人做过小扁豆凝集素(LCA)的纯化方法吗?我用DEAE-52不能起到好的纯化效果。

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        路明非AGXC


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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        可以用环磁氧粒固定纯化小扁豆凝集素。

        user-title

        路明非AGXCuser-title

        谢谢。这个试验方法没有了解过。可以简单的说一下实验过程吗?

         

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一些可能适用于LCA纯化的其他方法:

        聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE):LCA在PAGE中可以形成单一的带状结构,可以通过切割凝胶获得纯化的LCA。

        亲和层析:LCA可以与糖类配体如丙酸-β-甲酯引物(PAA)等结合,可以使用亲和层析柱进行纯化。

        碘化钠分数沉淀:LCA可以在一定的碘化钠浓度下沉淀,可以利用这一特性进行LCA的初步纯化。

        纤维素磁珠亲和层析:LCA可以与纤维素磁珠结合,可以使用纤维素磁珠亲和层析进行纯化。

        user-title

        路明非AGXCuser-title

        谢谢。请问碘化钠分数沉淀的试验方法和纤维素磁珠亲和层析中使用的是哪种的纤维素?

        user-title

        sswei

        有帮助

        扁豆凝集素粗品的制备:

        取扁豆种子100g,去皮磨成粉末,用无水乙醚(1:4,v:v)于4℃浸泡脱脂2次。然后,用含0.15 mol/L NaCl的0.02 mol/L Tris-HCI,pH 7.8缓冲液(1:4,v:v)在4℃下浸提两次每次24小时。 提取液经离心(4℃,10000rpm,30 min)后,弃去沉淀,上清液采用硫酸铵分段盐折法,取饱和度为40%~80%的沉淀,将沉淀溶于0.02mol/L Tris-HCl,pH 7.8缓冲液中得到相应的粗品。[4] 2.2.2 扁豆凝集素的纯化 粗品4℃下充分透析除盐,然后上经0.02mol/L Tris-HCI,pH 7.8缓冲液平衡的DEAE-52阴离子交换柱,充分淋洗后,换用含0.5mol/LNacl的相同缓冲液进行离子线性梯度洗脱,分部收集,流速0.5 ml/min,3 ml/管,经紫外和凝集兔红细胞活性检测后,收集活性部分。此活性部分对0.02 mol/L NaAc-HAc,pH 5.0缓冲液充分透析,然后上用相同缓冲液平衡的CM Fast Flow阳离子交换柱,充分淋洗后,换用含0.5 mol/LNaCl的相同缓冲液进行离子线性梯度洗脱,分部收集,流速0.5 ml/min,3 ml/管,经紫外和凝集兔红细胞活性检测后,收集活性部分。此活性部分用聚乙二醇20 000浓缩后,对含0.15 mol/L NaCl的0.02mol/L Tris-HCl,pH 7.8缓冲液充分透析,并用相同缓冲液平衡Sephacryl S-300柱,然后在FPLC上进行分子筛层析纯化,分部收集,流速为l ml/min,3 ml/管,经紫外和凝集兔红细胞活性检测后,收集活性部分,再过Sephadex G-25柱除盐后得扁豆凝集素纯品。

        user-title

        路明非AGXCuser-title

        谢谢,这个方法试过了。提取的LCA特别杂,您纯化的纯度高吗?

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