The Transcreener CD73 Assay

因为CD73是嘌呤信号的重要信使。外核苷酸酶是质膜结合酶，具有外向的活性位点，可将核苷酸代谢为核苷，对维持免疫稳态至关重要。CD39，将 ATP 和 ADP 水解为 AMP。AMP 被 CD73 进一步加工成腺苷，通过测量腺苷的产生，研究人员可以有效地确定酶的活性，以帮助寻找癌症等疾病的新疗法。从而对许多疾病状态产生重大影响。最近的研究表明，腺苷在肿瘤微环境中的免疫抑制中发挥着关键作用，并且外核苷酸酶正在成为有希望的免疫肿瘤学靶标。

Transcreener CD73检测可测量由ecto-5'-核苷酸酶（也称为5'-核苷酸酶，NT5E，分化簇73或CD73）产生的腺苷（ADO）。通过测量ADO的产量，研究人员可以有效地确定该酶的活性。

Transcreener CD73 Assay是一种用于检测CD73酶活性的荧光酶抑制剂筛选和酶动力学研究的方法。下面是一些基本的操作步骤和说明：

实验基本原理：

该试剂盒使用了一种荧光酶抑制剂来测定CD73酶的活性。当CD73酶将ADP-ribose（ADPR）从AMP释放时，转移酶将一个荧光标记的核苷酸添加到ADPR上，形成荧光标记的AMP（F-AMP）。这个标记使得F-AMP在440nm处发射荧光，可以通过荧光检测器进行检测。当荧光酶抑制剂存在时，它会竞争性地结合在F-AMP和ADPR之间，导致F-AMP荧光信号降低。这种信号降低可以被用来测定CD73酶的活性。

实验步骤：

步骤1：将标准物和待测样品加入到含有CD73酶和转移酶的反应体系中，并在37°C下孵育30分钟。

步骤2：将荧光酶抑制剂加入到反应体系中，并孵育15分钟。

步骤3：通过荧光检测器测定荧光强度。

阴性对照问题：

如果阴性对照样品也显示了荧光信号，可能是因为荧光酶抑制剂的配制不正确或者反应体系中存在其它荧光信号干扰物。可以尝试更换荧光酶抑制剂的配制，或者对反应体系进行优化，例如增加混合试剂的浓度、减少酶的用量等。同时，也需要排除其他可能的污染和技术错误的影响。