为什么连接pTT5载体的质粒用293细胞真核表达系统表达不出来，没有终止密码子，怀疑是质粒构建的问题，是不是需要优化密码子？

需要优化密码子，必要的时候要更换引物

连接pTT5载体的质粒无法在293细胞中表达的原因可能有多种，以下是一些可能的因素：

质粒构建的问题：确保目的基因序列正确连接在载体上，并且没有错误或突变。

合适的启动子：确定所使用的启动子在293细胞中是否能够起到足够的表达作用。可能需要尝试不同的启动子。

翻译后修饰：确保目的基因编码的蛋白质在真核细胞中能够正确进行翻译后修饰。如果蛋白质需要糖基化、磷酸化等修饰，需要确保这些修饰能够在真核细胞中发生。

转染效率：确保转染过程中目的基因能够被有效地送入293细胞，并且在细胞内被表达。

密度：细胞密度可能也是一个因素，需要确定适当的细胞密度以实现足够的表达水平。

对于密码子优化的问题，如果确信是翻译问题导致表达不出来，可以考虑对目的基因进行密码子优化，将其调整为适合真核细胞翻译的密码子，以增加表达效率。但需要注意的是，不是所有基因都需要密码子优化，优化过的密码子序列可能会影响目的基因的功能和结构。