• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        提出来的Rna浓度只有200ng/ul,略有降解,反转录出来的cDna作为模板,然后去跑pcr,是不是跑出来的条带都很浅呀

        user-title

        dxy_us7co4pq

        除了marker,其他条带实在是太浅了,不知道是什么原因,我的pcr体系是20ul,Tm值是60度,35个循环。我做这个是筛引物,现在除了marker那个孔,其他的孔都是用那个模板去筛不同引物,但是不可能我的这些引物与模板特异性都不好吧。条带实在是太浅了😭😭

        图片描述

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        有点浅。引物、模板没问题的话,就加cycle,多扩几轮,就亮了.(一般pcr酶和buffer是没有问题的,除非你反复冻融或者长时间放置室温)如果上一轮扩出来特异性好的话,可以适当降低退火温度.多扩了几轮,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了.你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,(自身发夹一般不会有太大影响);模板的话,要看看GC含量高不高,模板质量好不好.引物不好只能重新设计.模板不好可以加点DMSO(GC含量高),或者重新提取.差不多就这几个方面吧~

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        调整胶的ph和胶的浓度,之后再跑。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        200ng/ul的浓度算高了,一般反转录用500-1000ng,100ng都能跑出来很漂亮的条带。应该是你的引物不行。没有用内参做对比吗?

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        不能完全排除引物和模版的问题,建议换一下试试

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序