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        为什么二次pcr出来的条带还是这么浅,是胶的问题吗

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        dxy_us7co4pq

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        最右边的是marker(500)

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        5 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        我之前也遇到过这类情况。引物、模板没问题的话,就加cycle,多扩几轮,就亮了(一般pcr酶和buffer是没有问题的,除非你反复冻融或者长时间放置室温)如果上一轮扩出来特异性好的话,可以适当降低退火温度.多扩了几轮,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了.你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,(自身发夹一般不会有太大影响);模板的话,要看看GC含量高不高,模板质量好不好。引物不好只能重新设计。模板不好可以加点DMSO(GC含量高),或者重新提取。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        调整胶的ph和胶的浓度,之后再跑。

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        胶有些问题,marker也很淡,但两次扩增,pcr条带应该很亮,检查一下你的引物是否合适?

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        可能是胶的问题,因为你的marker都好模糊。或许电泳液也有问题。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        首先排除引物、模板问题,如果没有问题就加cycle,多扩几轮,就好了。

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