导致实时荧光定量 PCR 效率低有哪些原因？

1. PCR反应性能差。引物、试剂、PCR条件的再摸索。优化反应条件，或者重新设计PCR引物。

2. PCR阻害物质的混入。模板提取方法的再摸索。

3. 标准品稀释不准确。使用专用标准品稀释Buffer。

一:模板浓度太高了.模板总量一般不超过100ng

二:引物太多了,终浓度0.2uM就可以了,也就是10pmol/ul的引物只需0.5ul就可以了.

cDNA纯度不高，样本放置时间过长，试剂失活

引物和探针设计不当
使用了低质量的RNA

未使用“预混液”

引入交叉污染

未使用“– RT”对照