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科研学霸天团,48小时有问必答
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膜蛋白长时间超声裂解是否影响蛋白质酶活等功能?
balalaLy
长时间超声裂解会导致裂解液温度升高加速蛋白降解,同时超声也会导致蛋白质构象的改变。影响蛋白功能
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问
膜蛋白BN-PAGE,条带无法跑下来怎么办
天一湖医者
提蛋白裂解液太强或者时间太长 蛋白挂了 或者裂解液太弱 时间太短 裂解不充分蛋白浓度太低蛋白太小跑出去了 或者太大没跑下来转膜时间太短没转过去或者太长转过了抗体保存不当失效了二抗搞错了显色液有问题显色时间太长
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问
提取内质网沉淀如何非变性溶解?
天一湖医者
在提取后的蛋白沉淀中加入适当量的溶解液,加入溶解液的体积需要根据蛋白沉淀的大小以及下游实验所需的蛋白浓度决定。
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问
有没有比较懂流式的大佬呀,救救孩子吧,实在搞不懂了
Eason老歌迷
不同的仪器具有不同的设置,接收荧光素的通道可能存在不同。现有流式细胞仪配备的激光器种类主要为488nm、638nm、561nm和405nm,也有355nm或者375nm、532nm和808nm等。有的流式细胞仪只配备488nm;有的流式细胞仪配备两种激光器如488nm与638nm。为了扩展流式多色检测能力,有些流式细胞仪同时配备488nm、638nm和561nm等。
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问
用超滤管浓缩分泌蛋白时容易堵怎么办?
Eason老歌迷
必须进行定期冲洗,以保持一定的透过量,并能延长膜的使寿命。一般在规定的料液和压力下,在允许的pH值范围内,温度不超过60。C时,超滤膜可使用12-18个月。如膜清洗不佳,回使膜的寿命缩短。如果堵得比较厉害,还可以在NaOH溶液中加点NaClO效果会更好,洗膜的时候最好用热的溶液。
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问
DpnI酶切后电转,为什么还会有质粒转进去
bamboopiggy
DpnI 酶切后,最好胶回收纯化一下,再电转
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问
microRNA minics转染失败
Eason老歌迷
最好先用一个荧光标记的阴性对照做一个转染条件的摸索。
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问
原代细胞的转染
Eason老歌迷
还挺好转染的。一般常用的方法都是电穿孔法,磷酸钙共沉淀法,腺病毒转导,脂质体转染等。
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问
巯乙醇酸钠培养基配置
Eason老歌迷
给你分享一下我们实验室的巯乙醇酸钠培养基配方:示蛋白胨 10.0g,牛肉浸粉 17.5g,葡萄糖 5.0g,氯化钠 5.0g,磷酸氢二钾 2.0g,硫乙醇酸钠 0.5g,亚甲蓝 0.002g,琼脂 0.5g,pH7.2±0.2(25℃) 。
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问
自制溶液有效期如何确定?
天一湖医者
在实验阶段,配制一定浓度的溶液或者试剂作为受试液,分装后保存于适宜的环境中;按一定的时间间隔(日、周或月),取部分分装后标准溶液,以新配制标准溶液(X0)为标准对其进行测定,得到不同保存期的标准溶液浓度值(Xi)。计算X0与Xi相比较的En值,依据En值及Xi对应的保存期确定该标准溶液的有效期。可接受的En值(也称E比率)应在-1到+1之间,即En≤1(越接近零越好);2准确称取0.05000g三
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问
蛋白加his单标签纯化不干净,优先考虑什么标签
bamboopiggy
你改一下洗脱液的ph试试,一般his-tag还是很好使的。
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问
蛋白大小为40k左右,应该选择什么标签
天一湖医者
蛋白纯化首选His-Tag,Western blot首选Flag-Tag,免疫共沉淀可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc,活细胞成像则应该选择荧光蛋白等。
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问
在包涵体蛋白溶解后的重折叠实验中,有什么方法可用于重折叠稀释?
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问
蛋白条带总是粗粗的连在一起
balalaLy
就是蛋白量太大了,上样量减半吧
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问
在体和离体记录信号的frequency和amplitude分别代表什么意义?
天一湖医者
频率(Frequency),振幅(Amplitude),
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问
microRNA minics转染
balalaLy
有可能转染失败,刚转染的时候看到的淡淡的是没有转染进去的mimic,时间长了这些rna降解掉了就没有荧光了
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问
3T3-L1细胞油红染色
bamboopiggy
你的对照细胞呢?感觉染的太浅了,你的对照细胞啥样子?
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问
MCAO模型为什么总是进不到满意的深度
天一湖医者
插线栓主要还是要有耐心,插颈外的时候要牵扯颈外。不过只要你从颈外进到颈总,然后把牵扯颈外的线换个方向,线栓就会进到颈内了。
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问
3near gene是什么突变
天一湖医者
3near gene是3'-侧翼区(3'-near gene)的碱基突变
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问
求助:基因命名
dxy_gwrp7ndq
同源基因命名(1)在不同脊椎动物中的同源基因应有相同的命名。(2)如果一个基因先在其它物种中发现, 然后发现它在人中的同源基因, 则人的基因不应以H开头予以命名。(3) 为了区分来自不同物种的同源基因, 可在基因符号前加由人类细胞遗传学标准化委员会(Committee on Standardization in Human Cytogenetics)制定的三字母代码(物种缩写表请查阅网页http:
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