实验问答21,813,020 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

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问WB的目的蛋白条带一直做不出来

dxy_09escl70

我也不会，救救我，哈哈哈哈哈哈哈

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问关于RNA提取的相关问题（二）

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问求助：细胞微颗粒（microparticle）蛋白如何提取

lubuddy

你看看这个：Purification of exosomesWelton et al., have purified exosomes from the culture medium of a bladder cancer cell line HT1376 . After removing the cells by a gentle spin (400 g for 10 min) and the

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问细胞双标免疫荧光

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问关于内参，究竟如何加？

tingtinggu

内参就相当于对照，和实验组一样PCR，区别就是实验组加cDNA和primer，而内参只加primer，用DW代替cDNA，剩下的操作都是一样的

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问跪求ELISA步骤

kmsbio

首先样品处理：组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保

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问 PCR条件怎么优化呢？

我是金博士

PCR过程中如果没有找到最佳的扩增条件将会导致产生许多不确定的、不需要的产物，有时甚至没有目的产物；而在另一个极端，又可能没有扩增到任何产物。这时改变已知对引物－模板的忠实性和引物延伸有影响的诸多参数中的一两个，将会达到优化扩增的目的。其中最主要的优化变量包括 Mg2＋浓度、缓冲液pH值和循环条件，在循环条件中又以退火温度最为重要。1．降落PCR降落PCR代表了一种完全不同的PCR优化方法，它不是

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问 PCR出现污染怎么办？

偶然回头

一、污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.(二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三

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问假阴性，不出现扩增条带肿么办？

dxy_09escl70

对于这种情况你可以询问我，护体请看

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问 RT-PCR引物是从文章中找还是自己设计？

买买提奥

最好自己设计引物，文章的可信度要看文章的来源和你的验证结果。但是还是推荐你自己设计引物。我们通常是用primer5.0，和oligo 6设计引物。这两个软件大家用的最多。

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