实验问答21,849,631 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问酶联免疫封闭剂可以用纯生物素吗？不封闭对结果有影响吗

府宅

不可以用纯生物素，一般是使用生物素标记抗体，它和酶的标记率高，又不影响蛋白的活性。

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问对于荧光直标抗体，如何设计实验对照？

小布丁瑶瑶

1、直接法（1）标本自发荧光对照标本只加PBS或缓冲甘油封片，荧光显微镜观察组织内如果有荧光，称为自发荧光。（2）抑制试验可分为一步方法和二步方法。一步抑制方法：先将荧光抗体与过量未标记特异性抗体作等量混合，再加在标本上染色，结果应为阴性。二步抑制方法：标本先加未标记的特异性抗体，水洗后再加标记荧光抗体，结果应呈阴性或明显减弱的荧光。（3）阳性对照用已知阳性标本做直接法免疫荧光组织

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问RNA的提取原理是什么？

小布丁瑶瑶

RnA提取原理：Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

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问EDTA不小心弄到皮肤上，眼睛里，嘴里应该怎么办？

Kimser

EDTA用于福尔马林固定、石蜡包埋组织切片免疫组织化学染色前的抗原修复。虽然其ph是9，不过一般使用时都是稀释过的，所以危害不大，一旦进入眼睛或皮肤，先用大量流动自来水冲洗一段时间后再就医检查。注意防护，戴好手套和护目镜等，也可以换用柠檬酸缓冲液。

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问请问一下，有人做过羧化的TPGS与TEMPO发生酰胺反应吗？我采用的是EDC做催化剂，DMSO做溶剂，不知道为啥合不出来?

dxywode

根据反应的机理，是edc和hobt先和酸反应，然后是胺进攻而生成最终的产物酰胺。我认为最好是先加rcooh和edc、hobt让他们反应半个小时后。再加入胺。你也可以加点dmap，我认为它一方面是催化剂，另一方面它也起到了提供碱性的作用。我们实验室的经验是1当量酸+1当量edc+0.5当量dmap+1当量hobt，反应半小时后加入1.2当量胺，然后室温搅拌tlc跟踪反应。这种类型的反应有的几个小时就

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问双光素酶报告实验验证靶基因

迟C迟

双荧光素酶报告实验检测灵敏度很跳，酶标仪检测出来的数值就算是重复孔之间差异有时候都是数量级的差别。建议用不一样的实验系统再次验证实验结果。

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问mRNA药物在早期研发时，做动物/人体实验之前，需要做细胞水平的检测吗？

迟C迟

需要，看下CNS上相关的研究文章你就知道了。

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问qPCR半定量不稳定？

迟C迟

首先检查自己实验过程、试剂是否正确。其次换个实验系统再次验证自己的想法。如果不一样的实验系统验证出来的结果都是跟你的想法相反，可能要考虑自己的预期结果是否正确了。

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问为什么格林巴利病人免疫功能有缺陷

whilt-shirt

格林巴利是一急性或亚急性发作慢性损害神经根及中枢神经的脱髓鞘疾病，其病发严重时可侵犯高位脊髓前侧角细胞和脑干神经核以及大脑运动皮质锥体细胞危机生命，属免疫性疾病，大多属病毒感染所致。

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问之前跑还有条带，重新跑PCR就没条带了，这是什么情况？求解答

刹那芳华2333

检查一下是否是pcr的体系或者反应条件的问题，或者样品存在污染，琼脂糖的浓度或者eb浓度是否有问题

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问RNA干扰提取RNA注意事项？

迟C迟

① 使用无 RNase 的塑料制品和枪头，玻璃器皿要消毒，避免交叉污染；使用性能较好的移液器，如 Eppendorf、Thermo 等；② DEPC 有剧毒，小心配制；配制溶液应使用无 RNase 的水；③ 操作人员应戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套；④ 样品应避免反复冻融，否则影响提取 RNA 提取得率和质量；⑤ 若下游实验对 DNA 非常敏感，可用不含 RNase 的 DNase I

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问如何确保pbmc人源化小鼠的构建成功率？

dxy_65upljt0

同问？请问每只小鼠注射多少的CD34细胞合适呢？每ml脐带血能提出多少细胞呢？

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问RNA提取需要注意的事项有哪些？

崔果儿

1.操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。2.实验所涉及的离心管，Tip头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。3.实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free纪律二:阻止内源酶的活性4.选择合适的匀浆方法。5.选择合适的裂解液。6.控制好样品的起始量。7.任何裂解液系统在接近样品最大起始量时，抽提成功率急剧下降。8.RNA抽提成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功，而不

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问western blot一定要内参吗？感觉内参变异很大啊

whilt-shirt

内参是需要的，根据不同的组织选择不用的内参。

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问单细胞rna-seq测序的数据分析流程和bulk的rna-seq一样么。

dxy_gwrp7ndq

bulk的表达矩阵是reads比对到基因的数目；单细胞的表达矩阵是reads比对到某个细胞的某个基因的数目(barcode用来区分细胞；UMI用来区分转录本/基因)

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问请问单细胞测序技术，用流式细胞术挑选完免疫细胞后，为什么再进行聚类，有的免疫细胞又被划分成其他种类的免疫细胞了。

whilt-shirt

在进行流式细胞术的数据分析时，圈门的方式和逻辑体现了我们对数据把控的准确性，以及对客观数据的理解性。所以建议在数据分析前一定要自己去搞清楚指标和指标的关系，再来按照一定的逻辑进行圈门才会获得比较客观严谨的结果。首先我们要知道，通常展示的结果大部分的时候都只是流式结果的一小部分，比如我们对一个细胞进行双染，流式的结果信息就有4个，即这群细胞双染的双阳群1个，双阴群1个，单阳群2个；那3染呢？即三阳1

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问胰岛素制备实验中，有什么方法可以有效地去除胰脏周围的脂肪?

迟C迟

首先取材的时候要尽量去除脂肪组织。胰岛素制备过程中，首先准备粗制品：将新鲜或冰冻猪胰（牛胰更好）除去结缔组织等杂质，绞碎成冰胰浆。称重量置提取罐中，加入1．5—2．0倍量的酸性酒精溶液，使PH为2．5—3．0，醇含量为70%左右，在温度为13—150度搅拌提取3h,压滤，使浸液尽量滤出。残渣再用上法提取一次。

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问对于中药活性成分治疗急性溃疡性结肠炎，FHC细胞模型可以从哪几个方面来做机制呢？

丁香粉猪猪

1，自由基损伤，2，抗炎与免疫，3血液流变学

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问石蜡切片和冰冻切片的比较？

崔果儿

手术台上当时取的叫（快速）冰冻切片，顾名思义，很快就出结果，医生在台上等候，根据病理科给出的冰冻切片的结果判断良恶性，从而确定切除范围。石蜡切片是术中切除的组织取一小部分，术后送病理科，由病理科在几天内（疑难时间延长）出结果，用于盖棺定论这个组织的良恶性，最为最终诊断。简单说，冰冻迅速而及时，但是有错误的几率，恶性判断为良性等；石蜡稳，病理科说是啥病外科医就认是啥病。

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问定量分析两个有一定关系的基因

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