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科研学霸天团,48小时有问必答
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fed batch过程中细胞数过多怎么降低细胞数提高活率
dxy_gwrp7ndq
可以适当提高补料渗透压,减缓细胞生长
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问
质粒转染过程中对转染细胞的要求有哪些?
dxy_gwrp7ndq
转染时细胞密度以 70~90%(贴壁细胞)或 2×106~4×106细胞 / mL(悬浮细胞)为宜,细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞,凋亡增加等)
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问
表达量高的亚克隆细胞,个头特别大,一般细胞直径在16-17左右,但是它能到20左右,而且细胞数少,有什么方法可以降低细胞直径
bamboopiggy
是不是你的这个基因影响细胞的size?你可以直接挑出单克隆,进行单独培养,看看是否和正常的有差异。
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问
分选纯度的影响因素有哪些?
bamboopiggy
标本制作要轻柔,最好提前做个预实验,不要上来就直接做
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问
流式细胞上样速度如何确定
bamboopiggy
上样速度决定分选速度,推荐上样速度取决于你用到用的机器,有个最适的速度,看你用的流式的说明。和细胞大小关系不太大,却决于细胞浓度。
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问
怎么最大可能筛选到高细胞活性
bamboopiggy
胰酶消化不能过,反复吹打次数也别太多,保证比较高的细胞浓度,都可以提高细胞活动。
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问
通常选择什么滤网比较合适?
bamboopiggy
滤网有份型号,有不同孔径的,一般上流式用300-400目的比较好。也可以直接买带滤网的流式管
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问
流式时得不到比较合适的浓度
天一湖医者
这个有两个办法,一是在上机前计数(可以用血细胞计数板,或者细胞计数仪)还有一个就是把样本上机后,根据机器得到的浓度现调(用PBS等缓冲液稀释)
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问
细胞不够粘稠影响效果,该怎么解决?
小暮
有时候不够粘稠影响液滴断裂,我看你用的是EDTA,建议细胞消化的时候使用Accutase代替Try psin+EDTA
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问
细胞样本制备形态问题
bamboopiggy
胰酶消化时间要够,但是又不能过,反复吹打也不能太多次,否则细胞还是会受损,这个多做几次,摸好条件。
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问
流式细胞影响分选的结果有哪些?
bamboopiggy
确保单细胞悬液,细胞浓度够,否则时间会很长。
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问
流式细胞筛选标准问题
bamboopiggy
对,做分选,最大的问题就是细胞的皮实程度,如果细胞不够皮实,确实问题很大。可以考虑用growth mediun培养分选后的细胞。
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问
细胞流式分选得率不够
bamboopiggy
如果得率不够,你又不能提高你的处理方式的话,只能提高细胞量。
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问
小鼠免疫细胞的获取与计数该怎么写?
天一湖医者
免疫细胞的计数 (一)荧光抗体染色 应用范围广泛,可分别使用于B细胞、T细胞及其亚类、MФ及NK细胞的计数及表面标记的测定,多选用间接荧光抗体染色,即活细胞与其特异性单抗作用后再与荧光抗球蛋白抗体反应,经荧光显微镜观察可见膜荧光。 (二)花环形成试验 T细胞与B细胞皆可应用该试验进行计数。计数T细胞的方法称E花环形成试验(erythrocyte rosette formingcell
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问
THP1这种悬浮细胞如何进行基因敲除?如何挑单克隆?
bamboopiggy
THP1 最好用电转,用病毒都不一定能进去。敲完以后,你可以用流式做单细胞打板就可以
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问
流式细胞学检测时细胞有很多碎片
丁香清香
流式细胞学细胞碎片应该是死亡细胞
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问
淋巴结组织分散成单个细胞
异乡人hyq
三种方法,分别是粘附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法。一、粘附贴壁法我们将单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中,37℃温箱静置1h左右,这时候你会发现,“死皮赖脸”的单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上,而未贴壁的细胞几乎为纯淋巴细胞,随后用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。那么此时就达到一个分离的效果。但注意因为B细胞也有贴壁现象,分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。二、吸附柱过滤法同样将单个
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问
淋巴结组织细胞流式固定
丁香清香
根据方法而定,不能一概而言。如果是测细胞内抗原的,比如抗体识别活化caspase-3, 那就要固定。其他检测功能的,比如caspas3-3活性的,就要活细胞来测试。
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问
请问连翘脂苷A能通过血脑屏障吗?影响化合物药物通过血脑屏障的因素有哪些?如何确定?
异乡人hyq
连翘脂苷A可以通过血脑屏障。脂溶性越高的物质越容易通过,水溶性越强的通过能力差,与血浆蛋白的结合程度越高,通过越不易。可以通过载体转运系统,利用高选择性的载体蛋白,可以使一些难以通过血脑屏障的物质顺利入脑。
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问
骨吸收实验怎样才能成功?
玩骨头的小白
骨吸收实验和破骨细胞诱导实验是一样的,只是多加了一个骨片或者牙本质片,这里要注意骨片一定是要无菌的。培养体系里应该都有抗生素的,染菌的可能很有可能就是骨片没有灭菌,或者灭菌不完全
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