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科研学霸天团,48小时有问必答
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shRnA稳转株构建成功后需要隔段时间再次鉴定敲降效果吗?
bamboopiggy
一般三个月检测一次吧,我用的是带绿色荧光的,看荧光就可以
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问
构建稳转株是用哪种转染试剂好?PEI的使用方法如何?
bamboopiggy
只要能把质粒转进去,哪种转染试剂都可以,pei也可以,毒性低,效率高
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问
Saos2转染问题
Eason老歌迷
质粒DNA导入细胞有多种方法,包括物理介导(电穿孔法、显微注射和基因枪)、化学介导(磷酸钙共沉淀法、载体转染法等)和生物介导(原生质体转染、病毒介导的转染)三类途径。这三类技术中,又以载体转染法最为常用。国际上应用较早的转染载体多为脂质体类载体,但此类转染载体细胞毒性较大,转染效率往往也不够理想。近年类,纳米生物材料类载体的应用逐渐增多,此类载体最大的优点是细胞毒性较低,部分品牌载体的转染效率也显
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问
流式细胞仪检测细胞周期的话需要破膜染色吗?需要先固定细胞吗?使用什么破膜?谢谢各位大佬。
Eason老歌迷
需要破膜染色,比如说丙酮破膜法。先固定,可以拿甲醇固定。
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问
图里显示的是我在NCBI上寻找的一个蛋白序列的资料页面截图,请问这里的相关文献怎么查找啊?按照图里的信息找不到
Eason老歌迷
打开NCBI主页;左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称;在出来的所有条目第一行后面都有种属表明,比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属;再出现的页面中找到那个像数轴的图,在左侧有可以点击的蓝色数字,往往开头有AK、NM的开头,点击它,再出现的下拉框里选择GENEBANK;最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区
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问
关于电转化
balalaLy
电转所需要的质粒量大概在250ng左右,小提操作没问题的话可以满足
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问
涂板长了两层菌
Eason老歌迷
是不是你的抗生素失效了,我觉得根据你的情况这种可能性很大,倒平板培养基时一定要保证至少50度以下,否则弄不好抗生素就失效。
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问
流式细胞术检测细胞凋亡
Eason老歌迷
可能是你机器没调好,另外你可以多做几组对照一下。
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问
A549转染后形态改变 活性也不太对
balalaLy
加完病毒液之后多久换液?建议早点换液,一般看细胞的状态,状态不好20小时左右就得换液了。
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问
电转化质粒浓度
balalaLy
质粒浓度一般100ng/ul左右,1:25的体积比例加到感受态中
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问
用raw264.7诱导破骨细胞,加rankl 100ng/ml, m-csf 50ng/ml,诱导9天,trap 染色
天一湖医者
收到细胞后:内含的纸条上建议马上/尽快传代,换新的培养瓶和培养液。我的经验是直接将细胞放到培养箱中适应环境数小时或过夜。
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DNA杂交实验中的解离问题?
天一湖医者
可能已经降解了,严格进行操作吧.
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问
各个器官细胞,有什么独特的表面标志物,可以用抗体靶向?
Eason老歌迷
这个要是细讲起来就复杂了,我就拿几个常见的来举例吧,肝细胞癌的特异性标志物是AFP也就是甲胎蛋白。这些都是可以查到的,你用哪个细胞,你就去网上查一下文献就有。
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问
小鼠F0代生下的第一窝仔鼠为F1代,第二窝为F2代,第三窝为F3代吗?那如果F1代的小鼠进行合笼后生下的仔鼠该怎么命名,是第几代
Eason老歌迷
原则:F0代小鼠之间不能相互交配。F1代及F1代之后繁育原则:由F0代小鼠和野生型背景鼠交配得到的后代小鼠称为F1代。)阳性F1代小鼠可用于保种建系。那还是f2
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问
有人用阿佛丁针灸时麻醉吗?
balalaLy
阿佛丁属于国外比较公认但国内用的少的麻药,我做肌电生理是可以用的,麻醉应该也能用吧
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问
抑郁症模型旷场实验的结果是反的,是什么原因呢?
balalaLy
任何实验出现阴性结果或者反向结果都是有可能的,排除掉各种操作误差,重新再做就是了,一次说明不了问题
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镍柱纯化,bufferA冲不出来杂蛋白峰
Eason老歌迷
是不是色谱柱的问题,色谱柱对样品具有很高的选择性,如果在气相色谱仪使用中选用了与所进样品极性不相符的色谱柱,或选用色谱柱与样品会发生反应,则有可能造成样品无法正常到达检测器,从而无法出现相应的样品峰。色谱柱选用不合适原因造成的不出峰,可以通过选用与样品相适应的色谱柱解决。
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可以用丙酮提取细菌中的化合物吗
天一湖医者
可以,可以用丙酮提取细菌中的化合物。
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问
镍柱纯化目标蛋白,杂蛋白分离不开
秋秋欣欣
可以使用咪唑梯度洗脱,杂蛋白说明纯化有问题
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问
包装完的慢病毒的基因组是怎样的?有没有详细介绍慢病毒的书籍?
bamboopiggy
早期的慢病毒载体,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)改装而来,包括HIV-1型载体系统和HIV-2型载体系统。慢病毒属于反转录病毒。HIV-1为双链RNA病毒,它的基因组结构和其他的反转病毒类似,含有可编码三种主要病毒结构蛋白的基因,即gag、pol和env,gag基因编码病毒的核心蛋白如核衣壳蛋白(p7)、内膜蛋白(p17)和衣壳蛋白(p2
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