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问
有没有比较懂流式的大佬呀,救救孩子吧,实在搞不懂了
Eason老歌迷
不同的仪器具有不同的设置,接收荧光素的通道可能存在不同。现有流式细胞仪配备的激光器种类主要为488nm、638nm、561nm和405nm,也有355nm或者375nm、532nm和808nm等。有的流式细胞仪只配备488nm;有的流式细胞仪配备两种激光器如488nm与638nm。为了扩展流式多色检测能力,有些流式细胞仪同时配备488nm、638nm和561nm等。
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问
用超滤管浓缩分泌蛋白时容易堵怎么办?
Eason老歌迷
必须进行定期冲洗,以保持一定的透过量,并能延长膜的使寿命。一般在规定的料液和压力下,在允许的pH值范围内,温度不超过60。C时,超滤膜可使用12-18个月。如膜清洗不佳,回使膜的寿命缩短。如果堵得比较厉害,还可以在NaOH溶液中加点NaClO效果会更好,洗膜的时候最好用热的溶液。
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问
DpnI酶切后电转,为什么还会有质粒转进去
bamboopiggy
DpnI 酶切后,最好胶回收纯化一下,再电转
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问
microRNA minics转染失败
Eason老歌迷
最好先用一个荧光标记的阴性对照做一个转染条件的摸索。
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问
原代细胞的转染
Eason老歌迷
还挺好转染的。一般常用的方法都是电穿孔法,磷酸钙共沉淀法,腺病毒转导,脂质体转染等。
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问
巯乙醇酸钠培养基配置
Eason老歌迷
给你分享一下我们实验室的巯乙醇酸钠培养基配方:示蛋白胨 10.0g,牛肉浸粉 17.5g,葡萄糖 5.0g,氯化钠 5.0g,磷酸氢二钾 2.0g,硫乙醇酸钠 0.5g,亚甲蓝 0.002g,琼脂 0.5g,pH7.2±0.2(25℃) 。
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问
自制溶液有效期如何确定?
天一湖医者
在实验阶段,配制一定浓度的溶液或者试剂作为受试液,分装后保存于适宜的环境中;按一定的时间间隔(日、周或月),取部分分装后标准溶液,以新配制标准溶液(X0)为标准对其进行测定,得到不同保存期的标准溶液浓度值(Xi)。计算X0与Xi相比较的En值,依据En值及Xi对应的保存期确定该标准溶液的有效期。可接受的En值(也称E比率)应在-1到+1之间,即En≤1(越接近零越好);2准确称取0.05000g三
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问
蛋白加his单标签纯化不干净,优先考虑什么标签
bamboopiggy
你改一下洗脱液的ph试试,一般his-tag还是很好使的。
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问
蛋白大小为40k左右,应该选择什么标签
天一湖医者
蛋白纯化首选His-Tag,Western blot首选Flag-Tag,免疫共沉淀可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc,活细胞成像则应该选择荧光蛋白等。
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问
在包涵体蛋白溶解后的重折叠实验中,有什么方法可用于重折叠稀释?
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问
蛋白条带总是粗粗的连在一起
balalaLy
就是蛋白量太大了,上样量减半吧
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问
在体和离体记录信号的frequency和amplitude分别代表什么意义?
天一湖医者
频率(Frequency),振幅(Amplitude),
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问
microRNA minics转染
balalaLy
有可能转染失败,刚转染的时候看到的淡淡的是没有转染进去的mimic,时间长了这些rna降解掉了就没有荧光了
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问
3T3-L1细胞油红染色
bamboopiggy
你的对照细胞呢?感觉染的太浅了,你的对照细胞啥样子?
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问
MCAO模型为什么总是进不到满意的深度
天一湖医者
插线栓主要还是要有耐心,插颈外的时候要牵扯颈外。不过只要你从颈外进到颈总,然后把牵扯颈外的线换个方向,线栓就会进到颈内了。
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问
3near gene是什么突变
天一湖医者
3near gene是3'-侧翼区(3'-near gene)的碱基突变
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问
求助:基因命名
dxy_gwrp7ndq
同源基因命名(1)在不同脊椎动物中的同源基因应有相同的命名。(2)如果一个基因先在其它物种中发现, 然后发现它在人中的同源基因, 则人的基因不应以H开头予以命名。(3) 为了区分来自不同物种的同源基因, 可在基因符号前加由人类细胞遗传学标准化委员会(Committee on Standardization in Human Cytogenetics)制定的三字母代码(物种缩写表请查阅网页http:
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问
病毒分离样品脂类物质怎么去除?
天一湖医者
将预冷的有机溶剂等量加入、样品中,强烈振荡后,1000 r/min离心5 min,脂类和非病毒蛋白保留在有机相,病毒则保留在水相。应当注意的是,对有机溶剂有抗性的病毒才能这样处理。
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问
在表面活性剂裂解及酶解法进行生物样品预处理实验中,为避免细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中降解生物大分子,需要注意什么?
天一湖医者
为避免细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中降解生物大分子,可以加入蛋白水解酶抑制剂。
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问
这是之前问的一个问题,由于丁香平台不能回复,还请各位大佬看一下下面的图文
Eason老歌迷
我还是觉得一楼那个方法可行,查找相关酶的序列,和你的目标酵母菌序列进行对比。或者我在教你一个方法。你就用ncbi,打开NCBI,用关键词在Taxonomy数据库搜索。得出它的拉丁文,并且有一个问题需注意,酵母菌下还是有一些种的。知道了酵母菌的txid,就很容易了。一搜就出来了。上面已经定位到了酵母菌下的所有蛋白的基因了。上面如果要找核酸的,把数据库选择为Nucleotide就行了。接下来就是定位到
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